人源类溶菌酶蛋白4在受精过程中的作用及酶学性质研究
黄鹏1
钱能2
杜望春1
施尉珺1
孙庆文3
张宁2
1.上海健康医学院临床医学院,上海,2013182.上海健康医学院基础医学院,上海,2013183.复旦大学生命科学院,上海,200438
摘要：目的:对人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)在受精过程中的作用和重组蛋白的酶学性质进行研究,从而揭示LYZL4的生理功能. 方法:细胞免疫荧光法检测LYZL4在精子细胞上的亚细胞定位,RT-PCR分析精子表面LYZL4的来源,通过精子穿透试验分析LYZL4在受精过程中的作用.构建真核重组表达载体pPIC9K-LYZL4,转化毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导表达;甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析从发酵上清中纯化重组LYZL4蛋白(rLYZL4),通过Western印迹进行验证.ELISA测定rLYZL4的透明质酸结合能力,分光光度法测定rLYZL4的胞壁质酶活性、透明质酸酶活性和自由基清除能力. 结果:LYZL4免疫荧光定位于成熟精子头部的顶体膜上,RT-PCR检测表明精子表面的LYZL4蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,兔抗LYZL4多克隆抗体可明显抑制精卵结合.毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL4,酶活性分析显示rLYZL4无胞壁质酶和透明质酸酶活性,但能够结合透明质酸,并具有较强的自由基清除能力. 结论:LYZL4由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体膜上,可在精卵结合过程中发挥作用,其还能够结合透明质酸并清除自由基,提示LYZL4可能作为一种多功能分子在精子保护及精卵结合过程中发挥作用.
关键词：人源类溶菌酶蛋白4顶体精卵结合透明质酸自由基
分类号：Q492.4(生殖生理学)
论文发表日期：2018-01-31
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 109-115 )
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