大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法的建立
张同殿1
张连栋1
许丽丽2
李和程1
马玉波1
吴治中1
王子明1
1.西安交通大学第二附属医院泌尿外科,陕西西安,7100042.西北妇女儿童医院妇科内分泌科,陕西西安,710003
摘要：目的:建立大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法. 方法:取SPF级性成熟(体重200～250 g)SD雄性大鼠3只、雌性6只,根据阴道涂片判断雌鼠所属的发情时期,在其发情期及发情前期按照1∶2合笼,发现精子则记为怀孕0.5 d(0.5 dpc).解剖显微镜下分离出15.5 dpc胚胎睾丸,一式2份,1份直接进行HE染色,另1份置于软琼脂糖培养系统,37℃、5％ CO2进行培养,分为对照组和hCG组.培养当天为d0,倒置显微镜记录培养睾丸生长情况,每天更换并收集d1、d2、d3、d4培养液及d4的睾丸组织.检测培养液睾酮浓度,培养结束后睾丸固定脱水包埋进行组织学研究. 结果:应用阴道涂片方法可高效获得15.5 dpc大鼠,HE染色提示能准确分离出15.5 dpc胚胎睾丸.倒置显微镜下可见培养睾丸发育良好,体积逐渐增大,生精小管逐渐增粗、迂曲、清晰.培养液中可检测到睾酮,且睾酮浓度逐渐增高,d3时达到峰值;hCG可刺激睾酮分泌.HE染色可见培养后睾丸组织结构完整,无中央坏死现象发生,组织内有典型的生精小管,可见生殖母细胞、支持细胞及间质细胞;透射电镜下可见生精小管管腔中的生殖母细胞、支持细胞以及管腔外的间质细胞,细胞内的线粒体、内质网等细胞器,未见明显肿胀.结论:大鼠胚胎睾丸组织可在软琼脂糖培养系统中生长良好、保持活性,并向培养液中分泌睾酮.
关键词：胚胎睾丸体外培养软琼脂糖培养系统生殖细胞大鼠
分类号：R322.6(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(81471446)
论文发表日期：2018-11-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 967-973 )
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