闭合蛋白的胞外环缺失对小鼠TM4细胞紧密连接的影响分析
谭小方1
陈德宇2
丁家怡3
吴洁4
1.南京医科大学第一附属医院/江苏省人民医院/江苏省妇幼保健院生殖医学国家重点实验室,江苏南京210029;南通大学附属妇幼保健院生殖医学中心,江苏南通2260002.阜阳师范大学食品与生物工程学院,安徽阜阳2360373.南通大学附属妇幼保健院生殖医学中心,江苏南通2260004.南京医科大学第一附属医院/江苏省人民医院/江苏省妇幼保健院生殖医学国家重点实验室,江苏南京210029
摘要：目的:分析闭合蛋白的2个胞外环结构域在小鼠TM4细胞紧密连接中的功能. 方法:利用基因工程的方法,分别或者同时缺失掉闭合蛋白的2个胞外环,将缺失了胞外环3个闭合蛋白基因序列,分别克隆入pcDNA3.1表达载体,再转入TM4细胞.用RT-PCR和Western印迹分析闭合蛋白表达量,用紧密连接的体外细胞模型来分析闭合蛋白的胞外环对紧密连接程度的影响. 结果:测序结果表明pcDNA3.1-occludin△OCC1、pcDNA3.1-occludin△OCC2和pcDNA3.1-occludin△OCC1+ OCC2表达载体已经构建成功.RT-PCR和Western印迹结果显示3个缺失组闭合蛋白的mRNA和蛋白质的表达量都显著高于对照组.体外紧密连接模型分析结果表明闭合蛋白2个胞外环都能够增加TM4的紧密连接程度,其中,pcDNA3.1-occludin△OCC1转染组每天的大分子通过率均比pcDNA3.1-occludin△OCC2转染组显著降低(P＜0.05),表明闭合蛋白第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高. 结论:闭合蛋白2个胞外环都能够影响小鼠TM4细胞紧密连接的程度,并且第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高.
关键词：血-睾屏障闭合蛋白胞外环结构域紧密连接TM4细胞小鼠
分类号：R321.1(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(81771567)重点研究项目(KJ2017A338)南通市科技计划(GLZ16078)
论文发表日期：2020-08-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 675-680 )
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