雷帕霉素对葡萄糖诱导SD大鼠阴茎海绵体平滑细胞自噬与凋亡的影响
马开槐1
张有旺2
潘龙瑞2
夏彬铜3
郭阳4
丁妍5
谭艳6
1.湖北医药学院,基础医学院,湖北十堰442000;湖北医药学院,胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000;湖北医药学院,南水北调水源区环境与健康研究中心,湖北十堰4420002.湖北医药学院,基础医学院,湖北十堰4420003.湖北医药学院,锦州医科大学湖北医学院研究生培养基地,湖北十堰4420004.湖北医药学院,药学院,湖北十堰44200065.湖北医药学院,胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰4420006.湖北医药学院,基础医学院,湖北十堰442000;湖北医药学院,附属人民医院，湖北十堰442000
摘要：目的:观察雷帕霉素对葡萄糖诱导SD大鼠阴茎海绵体平滑细胞(CCSMC)自噬与凋亡的影响.方法:原代分离纯化鉴定CCSMC后分别用5.6、10、20、30、40 mmol/L葡萄糖处理CCSMC 48 h,mCherry-GFP-LC3B双荧光腺病毒转染细胞检测自噬流情况;Western印迹及PCR检测自噬相关指标、自噬相关基因5(ATG5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62、Beclin-1的蛋白和mRNA水平的变化;流式细胞术检测不同浓度葡萄糖处理后细胞凋亡情况,然后再检测用600 nmol/L雷帕霉素预处理2h再用40 mmol/L葡萄糖处理CCSMC 48 h后自噬相关指标LC3、Beclin1、P62的蛋白和mRNA水平的变化以及细胞凋亡的变化情况.结果:mCherry-GFP-LC3B双荧光腺病毒转染及PCR、Western印迹均提示在不同浓度葡萄糖处理后均发生了自噬现象,随着葡萄糖浓度升高,在10 mmol/L葡萄糖组自噬现象最强(P＜0.05),之后随着葡萄糖浓度升高自噬现象逐渐减弱(P＜0.05);流式细胞术检测发现相对于5.6 mmol/L葡萄糖组,10 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率无显著升高(P=0.302),但随着葡萄糖浓度升高,细胞凋亡率逐渐升高(P＜0.01).给予雷帕霉素预处理后,Western印迹及PCR检测均提示LC3的蛋白表达量,Beclin1的蛋白和mRNA表达量增多(P＜0.05),而P62的蛋白和mRNA表达量降低(P＜0.05),表明自噬增强.细胞凋亡率在雷帕霉素预处理后也显著降低(P＜0.01).结论:当不同浓度葡萄糖体外培养CCSMC,葡萄糖浓度在一定范围内时可能促进自噬,从而对CCSMC起到保护作用,但葡萄糖浓度超过一定浓度后,可能超过了CCSMC承受的范围,出现自噬降低,促进细胞凋亡,从而损害细胞活力和功能.而高浓度葡萄糖作用于CCSMC,雷帕霉素可能通过增强自噬,抑制细胞凋亡水平,从而对CCSMC起到保护作用.
关键词：勃起功能障碍阴茎海绵体平滑肌细胞细胞自噬细胞凋亡雷帕霉素大鼠
分类号：R698+.1(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：教育部国家留学基金(2018084203)湖北省教育厅科学研究项目(B2016134)
论文发表日期：2020-11-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 969-978 )
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