DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响
李娜
苗聪秀
毕慧玲
苗卉
李丹
李敏
长治医学院附属和平医院生殖遗传科/山西省卫健委生殖工程委级重点实验室/长治医学院生殖遗传研究所,山西长治046000
摘要：目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响.方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平.干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平.结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA 甲基化水平[(14.16±2.62)％]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)％]和 DNMT1-NC 组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)％,P＜0.05],对照组与 DNMT1-NC 组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).分化48 h后,与 对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P＜0.05);对照组与DNMT1-NC组Nanos2、PLZF、Stra8 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关.
关键词：DNA甲基转移酶1精原干细胞分化小鼠
分类号：R321.1(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(31971073)山西省自然科学基金(201901D111325)山西省卫生计生委科研项目(2017162)
论文发表日期：2022-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 395-401 )
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