小鼠附睾小体特异性mRNA传递入N2a和TM4细胞的研究
吴春林1
李红钢2
熊承良2
谈慧平3
1.武汉市第一医院妇产科,湖北武汉 4300222.华中科技大学同济医学院生殖健康研究所,湖北武汉 430030;武汉华科生殖专科医院,湖北武汉 4300133.华中科技大学同济医院生殖医学中心,湖北武汉 430030
摘要：目的:研究小鼠附睾小体特异性mRNA能否递入Neuro-2a(N2a)及TM4细胞中,为探讨附睾小体mRNA功能提供实验依据.方法:通过RT-PCR检测附睾特异性基因(Adam7、Crisp1、Defb22、Wfdc2、Wfdc9)在成年雄性BALB/c小鼠睾丸、附睾、附睾小体和精子中,以及在人睾丸、精浆小体和精子中的存在情况.通过低速离心、过滤、超速离心方法分离BALB/c小鼠附睾小体,通过PKH26进行荧光标记,与饥饿培养24 h的N2a和TM4细胞共孵育1 h,分别以未标记PKH26的附睾小体组、无附睾小体的加PKH26染料组、未加附睾小体和PKH26染料阴性组作为对照,观察附睾小体是否与N2a和TM4细胞融合并被摄取.通过RT-PCR对共孵育1 h后N2a和TM4细胞进行附睾特异性基因的检测.结果:Adam7和Crisp1在小鼠附睾、附睾小体和精子中存在,睾丸中无表达,在人精浆小体和精子中存在,睾丸中无表达.PKH26和hoechst33258荧光双标结果显示小鼠附睾小体与N2a和TM4细胞融合并被摄取,RT-PCR结果表明共孵育1 h后N2a和TM4细胞可以检测到Adam7和Crisp1基因的mRNA.Western印迹结果显示与附睾小体孵育后的N2a和TM4细胞可以检测到CRISP1蛋白.结论:附睾小体可传递附睾特异性mRNA Adam7和Crisp1进入到细胞中,其中Crisp1可能被翻译成蛋白,其功能和意义有待进一步研究.
关键词：附睾小体Adam7Crisp1细胞间通讯
分类号：R-332(实验医学、医学实验)R339.2+1(人体生理学)
论文发表日期：2023-02-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 99-105 )
英文信息