短发卡RNA特异性抑制Survivin基因在U251细胞中的表达
甄海宁1
章翔1
杨彤涛2
吴元明3
白文涛3
付洛安1
章薇1
高大宽1
胡世颉1
王西玲1
1.第四军医大学西京医院全军神经外科研究所,陕西,西安,7100332.第四军医大学唐都医院全军骨科中心,陕西,西安,7100333.第四军医大学基础部生物化学教研室,陕西,西安,710033
摘要：目的构建针对人Survivin基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其在人脑胶质母细胞瘤U251细胞中对Survivin基因表达的抑制作用.方法根据Survivin cDNA编码序列,设计并合成针对Survivin基因的特异性RNA干涉片断,将其克隆入pWH1质粒载体,构建Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR.通过脂质体介导将pWH1-SR载体和空载体pWH1分别转染入U251细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞系U251-SR和U251-P.采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测Survivin mRNA和蛋白在U251、U251-P和U251-SR细胞中的表达水平.结果成功构建了Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR,经酶切鉴定证实克隆正确.获得了稳定转染pWH1-SR载体和空载体pWH1的细胞系U251-SR和U251-P.U251-SR细胞Survivin mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,抑制率分别达87%和91%;U251-P细胞Survivin基因表达水平无明显变化.结论特异性shRNA能够明显抑制Survivin基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究Survivin在U251细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.
关键词：RNA干涉短发卡RNASurvivin胶质瘤
分类号：R730.54(一般性问题)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(39970752)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 496-500 )
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