腺病毒表达载体pAdEasy-1/pAdTrack-CMV-Shh-N的构建及表达
孙朝晖
修波
崔志强
左焕琮
1.清华大学玉泉医院神经外科,北京,1000492.清华大学玉泉医院神经外科,北京,1000493.清华大学玉泉医院神经外科,北京,1000494.清华大学玉泉医院神经外科,北京,100049
摘要：目的构建携带Sonic hedgehog氨基端(Shh-N)基因的腺病毒表达系统并在包装细胞中制备相关病毒颗粒,以用于中枢神经系统疾病的基因治疗.方法应用多聚酶链式反应(PCR)技术扩增Shh-N,然后克隆至含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体pAdTrack-CMV,在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdEasy-1进行重组,构建pAdEasy-1/pAdTrack-CMV-Shh-N,然后转染包装细胞293细胞系.结果成功获得Shh-N片段并构建了缺陷型腺病毒表达载体pAdEasy-1/pAdTrack-CMV-Shh-N,经限制性酶切后证实该表达载体含Shh-N基因,在293细胞中小规模扩增病毒后,经PCR检测证实病毒颗粒中存在Shh-N基因.结论获得了携带Shh-N的腺病毒颗粒,可将之用于基因修饰神经细胞,进行促细胞存活和定向分化诱导研究,为自身干细胞和外源性细胞移植治疗中枢神经系统疾病的临床应用提供理论和实验基础.
关键词：Sonic hedgehog重组腺病毒表达载体293细胞
分类号：R3(基础医学)
资助基金：北京市自然科学基金(7062036)清华-裕元医学科学研究项目(20240000513)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 240-243 )
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