稳定整合靶向性Survivin基因RNA干涉载体胶质瘤细胞系的建立
张家墅1
甄海宁1
章翔1
张瑞2
左毅1
王鹏1
霍军丽1
1.第四军医大学,西京医院全军神经外科研究所,陕西,西安,7100332.第四军医大学,基础部免疫学教研室,陕西,西安,710033
摘要：目的 构建针对细胞凋亡抑制蛋白survivin(SVV)基因的特异性RNA干涉载体,并建立稳定转染该干涉载体的人胶质瘤细胞系.方法 设计合成针对SVV基因和针对荧火虫荧光素酶(FLF)基因特异性RNA干涉片断,并分别克隆入pSilencer3.1-H1neo载体中,成功构建SVV基因RNA干涉载体pSilencer3.1-SVV和无关序列载体pSilencer3.1-FLF.RNA干涉载体、无关序列载体和空白载体经脂质体法转染胶质瘤细胞系U251,经G418筛选,采用实时定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)、免疫蛋白印迹(Western blot)和免疫细胞化学方法 分别检测SVV基因在转染细胞中的表达情况.结果 酶切鉴定和核苷酸序列分析证实,成功构建了SVV基因RNA干涉载体pSilencer 3.1-SVV.获得了稳定转染干涉载体、无关序列载体和空白载体的细胞系分别命名为U251-S、U251-F和U251-P.U251-S细胞中SVV的mRNA和蛋白表达受到明显抑制,U251-F和U251-P细胞中SVV基因表达水平无明显变化.结论 SVV基因特异性RNA干涉载体能够明显抑制SVV基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究SVV在胶质瘤细胞系U251中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.
关键词：RNA干涉Survivin胶质瘤
分类号：R730.54(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(30672371)陕西省自然科学基金(2008k09-09)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 218-222 )
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