DEC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其稳转胶质瘤细胞系的建立
魏学辉1
李晓明1
张耀1
茹懿2
王秦豪2
李霞2
林伟1
1.第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安,7100322.第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西西安,710032
摘要：目的 构建人分化型胚胎软骨发育基因1 (DEC1)的短发卡RNA (shRNA)慢病毒表达载体并建立稳定敲减DEC1表达的人脑胶质瘤细胞株T98G.方法 根据GenBank中DEC1基因cDNA序列设计合成两条特异性shRNA序列,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,分别克隆到Psi-LVRU6MP质粒载体内,经酶切电泳、DNA测序鉴定后包装成慢病毒颗粒.再以3组慢病毒感染胶质瘤细胞系T98G,用嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察mCherry的表达,Western Blot检测各组DEC1蛋白的表达水平.结果 DEC1基因shRNA慢病毒表达载体经酶切、测序鉴定证实克隆正确.荧光显微镜检测显示各组细胞均已被慢病毒高效感染.Western Blot结果显示,两干扰组细胞各自DEC1蛋白表达水平明显低于未处理组和阴性对照组,分别占未处理组的39.47％±0.69％和41.17％±0.89％ (P ＜0.05),但两干扰组之间无显著性差异(P＞0.05);阴性对照组与未处理组相比亦无明显差异(P＞0.05).结论 成功构建DEC1基因shRNA慢病毒表达载体,感染胶质瘤T98G细胞系获得成功.两干扰组慢病毒均能明显敲减目的基因DEC1的表达,为进一步研究DEC1在胶质瘤细胞系T98G中的生物学功能和作用机制提供了实验基础.
关键词：分化型胚胎软骨发育基因1短发卡RNA慢病毒表达载体胶质瘤
分类号：R739.41(神经系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81572469)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 15-19 )
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