外泌体miR-146a对N9型小胶质细胞介导炎症反应的作用
杨永祥1
崔效玮2
叶玉勤3
苏鑫洪4
张欣4
孔垂广4
白威4
贺晓生4
1.空军军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;解放军第422医院神经外科,广东湛江5240052.空军军医大学基础医学院四大队十三队,陕西西安,7100323.空军军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;解放军第163医院神经外科,湖南长沙4100004.空军军医大学西京医院神经外科,陕西西安,710032
摘要：目的 探讨外泌体源性微小RNA-146a(micro RNA-146a,miR-146a)对N9型小胶质细胞介导的炎症反应的作用和机制.方法 利用装载有miR-146a的质粒转染人胚肾293(human embryonic kidney 293,HEK293)细胞.然后应用SBI(system biosciences)试剂盒提取外泌体,通过电镜观察和蛋白印迹法(Western Blot,WB)鉴定外泌体.将外泌体加入N9型小胶质细胞培养皿内,用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导炎症反应后利用聚合酶链法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测N9型小胶质细胞内miR-146a的含量,用RT-PCR和WB法检测Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路上肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor6,TRAF6)和白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1)的表达水平,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测与神经炎症相关因子干扰素β(interferon-β,IFN-β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β )、白介素6(interleukin-6,IL-6)的表达水平.结果 通过质粒转染和SBI试剂盒成功获取了内含有miR-146a的外泌体,应用该外泌体干预N9型小胶质细胞后可以提高miR-146a的含量.与单纯采用LPS刺激相比,用内含miR-146a的外泌体干预后再接受LPS刺激作用可明显降低IFN-β 、TNF-α、IL-1β和IL-1的表达水平,同时明显降低细胞内TRAF6分子的mRNA和蛋白表达,而对IRAK1的表达没有影响.结论 外泌体源性miR-146a提高了N9型小胶质细胞内MiR-146a的表达量,并通过调控TLR4信号通路中TRAF6分子的表达负反馈抑制N 9型小胶质细胞介导的炎性反应.
关键词：外泌体miR-146a小胶质细胞炎症反应
分类号：R739(肿瘤学)
资助基金：国家自然科学基金(81471264)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 500-503 )
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