3种褐黄血蜱基因组DNA提取方法的比较
焦雪丽
张鑫
杨惠
苏婧
南通市疾病预防控制中心,江苏 南通 226007
摘要：目的 在保持褐黄血蜱Haemaphysalis flava寄生蜱虫体形态完整的前提下,综合比较 95℃水浴法、改良碱裂解法、离心柱法 3 种提取方法对蜱组织DNA提取质量的差异,筛选适用于蜱鉴定分型的高效稳定基因组DNA提取方法.方法 取蜱标本的一只足作为实验样本,通过 95℃水浴法、改良碱裂解法和离心柱法分别提取样品中基因组DNA,检测提取物浓度以及A260/A280 和A260/A230 比值,并通过PCR技术检测蜱分型相关基因16S rDNA(16S ribosoma DNA,16S核糖DNA)、ITS2(internal transcribed spacer 2,内转录间隔区2)的片段扩增效率,综合分析 3 种提取方法的优劣.多组之间使用单因素方差分析(ANOVA检验),两组之间比较采用t检验分析.P＜0.05 为差异有统计学意义.结果 3 种提取方法均可获得足量的蜱基因组DNA,改良碱裂解法提取效率显著高于其他 2 种方法(P＜0.05),A260/A280 和A260/A230 比值结果表明离心柱提取法获得的DNA纯度更高,进一步的PCR实验表明,在模板量一致的情况下,以离心柱法提取的DNA为模板扩增产生的 16S rDNA、ITS2 片段扩增效率更高,而以 95℃水浴法提取的 DNA 为模板扩增产生的 16S rDNA、ITS2 片段效率较低.结论 离心柱法是提取蜱基因组DNA高效且实用的方法,能够在保持虫体形态完整的情况下满足对寄生蜱进行后续基因分型实验的要求.
关键词：褐黄血蜱寄生蜱基因组DNA核酸提取PCR
分类号：R384.4(医学寄生虫学)
资助基金：南通市卫生健康委员会科研课题(MS2023092)
论文发表日期：2024-08-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 354-358 )
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