原癌基因蛋白18第38位丝氨酸点突变肝癌细胞系的建立
李娟1
龚舒1
刘陆阳2
陶忠桦1
王琼3
甘淋1
1.泸州,泸州医学院医学基础研究中心,四川,6460002.国家中医药管理局中医师资格认证中心,北京,1000293.646000,四川,泸州,泸州医学院医学基础研究中心;100029,北京,国家中医药管理局中医师资格认证中心
摘要：目的 构建人原癌基因蛋白18(oncoproteins 18,Op18)丝氨酸(serine,Ser)38磷酸化位点点突变(S38A)的肝癌细胞系.方法 通过重叠延伸聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法定点诱变Op18 S38A,测序鉴定突变结果.采用脂质体转染和抗生素筛选,建立Op18野生型(wild types,wt)和Op18 S38A的肝癌细胞株HCCLM6;并用Western blot进行鉴定.结果 定点突变构建Op18 S38A的重组质粒经测序证实Op18第38位核苷酸突变由丝氨酸变为丙氨酸.将Op18 wt和Op18 S38A转染肝癌细胞株HCCLM6,抗生素压力筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Western blot结果显示Op18第38位丝氨酸磷酸化(pS38)在Op18 S38A细胞中的表达较Op18 wt和对照组细胞明显下降(P<0.05).结论 建立了稳定表达Op18 S38A的肝癌细胞株,为研究Op18位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供细胞模型.
关键词：原癌基因蛋白18定点突变磷酸化肝癌
分类号：R73-35+1(肿瘤学实验研究)R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81001655)四川省教育厅项目(11ZB125)泸州医学院项目(2011-122)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 67-69 )
英文信息