大鼠成骨细胞微小RNAs的筛选研究
潘欣1
曾思良2
梁兴伦3
嵇承栋4
周文博5
周文锐3
李琛3
朱敏洁3
沈琪3
1.同济大学附属杨浦医院中心实验室, 上海,2000902.上海师范大学天华学院康复治疗系, 上海,2018153.同济大学附属杨浦医院老年科, 上海,2000904.同济大学附属杨浦医院科研部, 上海,2000905.同济大学附属杨浦医院普外科, 上海,200090
摘要：目的 应用微小RNAs(microRNAs,miRNAs)芯片技术筛选补肾方含药血清干预大鼠成骨细胞后差异表达的miRNAs,与前期获得的软骨细胞差异miRNAs比较,筛选出共有差异miRNAs,以探讨补肾方通过共有miRNAs调控靶基因表达发挥治疗效应的机制.方法 原代培养的大鼠成骨细胞经碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色和矿化结节染色鉴定后,用补肾方含药血清干预成骨细胞,在给定时间点收获细胞,抽提纯化总RNAs行miRNAs芯片检测,并挑选差异表达4倍以上的miRNAs行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应验证.结果 所培养的原代细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色和矿化结节染色均为阳性.与补肾方含药血清干预成骨细胞1 d相比,干预6 d的共有229个2倍以上表达差异的miRNAs,其中上调的52个、下调的177个.差异表达4倍以上的miRNAs实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应结果与芯片数据一致.与前期软骨细胞差异miRNAs芯片数据比较,miRNAs均上调2倍以上的有8个、下调4倍以上的2个.结论 补肾方含药血清干预成骨细胞获得了一套较为特异的miRNAs,初步预测上调的miRNAs可能通过靶向Runx2、Wnt、Notch、Axin2等基因在骨发育、骨形态发生、骨吸收以及软骨内成骨形成等相关的信号通路中发挥作用.
关键词：补肾方成骨细胞微小RNAs芯片差异表达大鼠
分类号：R342.2(基础医学)R349.5-332(基础医学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2013CB531601)国家自然科学基金(30972633,81173312)上海市卫生计生委科研项目(201640253)同济大学附属杨浦医院学科带头人攀登计划(YE2201608)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 68-73 )
英文信息