5-氮胞苷联合碱性成纤维生长因子诱导人胚胎干细胞定向心肌样细胞分化的实验研究
王力1
方志荣1
高连如2
张宁坤2
徐小红2
朱智明2
1.解放军第四一三医院内科, 浙江 舟山,3160002.海军总医院心血管内科, 北京,100048
摘要：目的 探讨5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)联合碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)定向分化为心肌样细胞的可行性.方法 采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层细胞体外培养hESCs,经悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB),贴壁后分为无诱导剂组(对照组)、5-aza诱导组、bFGF诱导组、5-aza+bFGF联合诱导组4组诱导培养.诱导时间为2周.倒置相差显微镜下连续动态观察细胞形态学变化,并计算各组出现自发搏动的EB,以定量聚合酶链反应检测心肌细胞特异性基因NKX2.5、GATA4、α-actin,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT).结果 EB克隆贴壁诱导3~4 d后部分细胞出现自发性节律性搏动,以5-aza+bFGF联合诱导组为著.14 d后定量聚合酶链反应检测示5-aza+bFGF联合诱导组NKX2.5、GATA4、α-actin表达显著高于其他3组(P<0.05).免疫荧光法示5-aza+bFGF联合诱导组cTnT的表达最为明显(P<0.05).结论 hESCs在体外经5-aza+bFGF联合诱导后可定向心肌细胞分化,该诱导方案为心肌再生与组织工程领域的研究奠定了基础.
关键词：心肌细胞细胞分化人胚胎干细胞5-氮胞苷碱性成纤维生长因子
分类号：R394.26(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81170094)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 137-141 )
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