天然生物活性N-酰基高丝氨酸内酯小分子抗原的化学合成及其抗体生成初探
付凯飞1
王欲晓1
李军2
吴成林1
周丽君1
1.海军总医院中心实验科,北京,1000482.海军总医院中心科训科,北京,100048
摘要：目的 人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated homoserine lactones,N-aHSLs)完全抗原并制备相应单抗,建立N-aHSLs免疫检测的新方法及海洋弧菌N-aHSLs动态监测.方法 以月桂酸和高丝氨酸内酯为主要原料,通过多步系列化学反应人工合成N-十二酰高丝氨酸内酯(N-lauroyl-homoserine lactone,N-C12-HSL)及含羧基活性交联基团的半抗原衍生物12-羧基-N-十二酰高丝氨酸内酯(12-carboxyl-N-decanoyl-L-homoserine lactone,12-CD-LHL),用1H-磁共振、高压/效液相色谱仪和液相色谱-质谱联用方法确证合成产物的结构,并用生物感应法检测合成N-aHSLs的天然生物活性;用N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法将12-CD-LHL半抗原衍生物连接到载体蛋白;将N-C12-HSL人工完全抗原通过传统单抗制备技术,获得抗N-aHSLs杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法鉴定其特异性和效价.结果 质谱、磁共振氢谱分析结果与理论预测相同,成功合成目标产物N-C12-HSL和12-CD-LHL半抗原衍生物;所合成的N-aHSLs能够分别激活生物感应菌株大肠杆菌MG4和紫色色杆菌026并使之显色;紫外吸收光谱扫描结果显示,半抗原已分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白发生偶联,成功制备完全抗原;共获得3株抗N-C12-HSL单抗,均具有良好的免疫反应性.结论 N-aHSLs完全抗原和相应的单抗制备为N-aHSLs动态监测和后续研究奠定了基础.
关键词：N-十二酰高丝氨酸内酯半抗原衍生物单抗
分类号：R344(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(31400107)军队重点项目(BHJ14J004)海军总医院创新培育基金(CX201201)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 207-212,224 )
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