人CD147胞内结构域蛋白的表达与纯化
吴东1
南刚2
李佳悦2
刘芬玲2
崔洪勇2
1.710032 陕西 西安,空军军医大学基础医学院学员一大队2.710032 陕西 西安,空军军医大学基础医学院细胞生物学教研室
摘要：目的 构建人CD147胞内结构域(CD147 intracellular domain,CD147ICD)融合蛋白质粒,表达、提取、纯化CD147ICD蛋白并进行蛋白质互作分析.方法 将CD147ICD的cDNA片段插入pET-32a(+)质粒载体后,转化大肠杆菌Origami B(DE3)感受态细胞,大量培养后用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷诱导蛋白表达,超声破碎法裂解细胞,采用Ni-Sepharose FF预装柱纯化TrxA-His6-CD147ICD融合蛋白,经凝血酶酶切、超滤后获得CD147ICD蛋白.结果 CD147ICD融合蛋白质粒经测序比对后表明构建成功;采用Ni-Sepharose FF预装柱纯化的TrxA-His6-CD147ICD融合蛋白纯度和浓度均较高,经凝血酶酶切、超滤后获得的CD147ICD蛋白纯度在95％以上,蛋白浓度为0.74 mg/mL.结论 纯化出了高纯度的、具有生物学活性的CD147ICD蛋白,为CD147ICD互作分子的鉴定及结构解析奠定了基础.
关键词：CD147胞内结构域表达与纯化
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(31601127)
论文发表日期：2019-12-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 326-328,338 )
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