SP110基因过表达慢病毒载体的构建与包装
贾鹏霞1
刘丙雨1
李新月1
张万江2
程江1
吴江东2
马雅静1
1.832000 新疆石河子,石河子大学新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室;832000 新疆石河子,石河子大学医学院第一附属医院检验科2.832000 新疆石河子,石河子大学新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室
摘要：目的 构建核体蛋白SP110基因过表达慢病毒载体,并进行慢病毒包装,为研究SP110在结核病中的作用机制奠定基础.方法 利用PCR技术获得SP110基因序列并将其插入到慢病毒穿梭质粒LV5中,获得重组慢病毒质粒V-SP110,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,用RNAi-Mate将重组质粒和慢病毒包装质粒系统(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)包装成重组慢病毒颗粒,共转染293T细胞,包装产生慢病毒.通过荧光显微镜或FACS计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度.结果 酶切鉴定结果显示产生约1 650 bp的片段,片段大小与SP110基因cDNA大小一致.DNA测序比对测序结果与预期SP110基因序列完全一致,说明SP110基因正确插入载体中,成功构建了SP110基因过表达载体.经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为1.0× 108 TU/mL的重组慢病毒LV5-SP 110.结论 SP110基因过表达慢病毒载体构建与包装成功完成,为进一步探讨SP110基因在结核病发生发展中的作用提供工具.
关键词：SP110基因慢病毒构建慢病毒包装
分类号：R349.6(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(U1803127)兵团重点领域科技攻关计划(2018AB019)
论文发表日期：2020-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 75-78 )
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