敲低MKL1通过激活自噬流抑制心肌成纤维细胞活化与纤维化表型的作用研究
魏俊萍1
符达佳2
孟庆雯1
林道飞1
林燕仔1
1.570102 海口,海南医学院第一附属医院心血管内一科2.570102 海口,海南医学院第一附属医院心电图室
摘要：目的 探究敲低巨核细胞白血病因子1(MKL1)对心肌成纤维细胞(CFs)活化与纤维化表型的影响及作用机制.方法 选取人CFs,敲低CFs中MKL1 表达,检测敲低效果;将CFs分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、shNC + AngⅡ组、shMKL1 +AngⅡ组,shNC +AngⅡ组与shMKL1 +AngⅡ组分别转染shRNA NC、shRNA MKL1,AngⅡ组、shNC +AngⅡ组及shMKL1 +AngⅡ组CFs再使用AngⅡ刺激建立心肌纤维化模型;处理结束后,检测各组CFs增殖活性,测定各组CFs细胞培养上清液中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)水平,观察各组CFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,检测各组CFs中α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达水平.观察各组CFs自噬流,检测各组CFs中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值、Beclin1 蛋白表达水平.结果 转染shMKL1 的CFs中MKL1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均低于未转染的CFs和转染shNC的CFs(P<0.05);与对照组比较,AngⅡ组同一时间下CFs增殖活性升高(P<0.05),上清液中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ水平升高(P<0.05),CFs中α-SMA荧光染色强度增加,α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白相对表达量上调(P<0.05),自噬溶酶体与自噬体减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值下降(P<0.05),Beclin1 蛋白相对表达量下调(P<0.05);与AngⅡ组、shNC +AngⅡ组比较,shMKL1 +AngⅡ组同一时间下CFs增殖活性降低(P<0.05),上清液中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ降低(P<0.05),CFs中α-SMA荧光染色强度减弱,α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白相对表达量下调(P<0.05),CFs中自噬溶酶体与自噬体增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值升高(P<0.05),Beclin1 蛋白相对表达量上调(P<0.05).结论 敲低MKL1 能够抑制CFs活化与心肌纤维化表型,该作用可能与激活细胞内阻滞的自噬流有关.
关键词：心肌纤维化心肌成纤维细胞细胞增殖巨核细胞性白血因子1自噬流纤维化表型血管紧张素Ⅱ
分类号：R542.23(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：海南省卫生健康行业科研项目(22A200151)海南省自然科学基金青年项目(821QN401)
论文发表日期：2024-02-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
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