益气活血化痰方作用于巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2信号通路抗动脉粥样硬化的实验研究
黄宇
赵汉君
苏立杰
陈婕
阮小芬
姚轶立
王肖龙
薛金贵
摘要：目的 通过验证巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路,探寻益气活血化痰方抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制,为益气活血化痰方抗AS提供依据.方法 小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养与构建AS模型细胞并分组;巨噬细胞外泌体的提取;免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标记表达,评价外泌体的质量;提取总RNA,反转录,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miRNA表达;双荧光素酶报告基因检测实验分析miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系;益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片进行比对,寻找差异性基因.结果 ①外泌体的鉴定:对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组细胞上清液中CD61与CD81几乎没有表达,而对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组提取的外泌体中CD61与CD81均高表达,表明外泌体提取成功.②外泌体微小RNA(miRNA))qPCR Array与生物信息学分析:检索3个与AS相关的数据库,有12个miRNA共存在于这3个数据库.③通过芯片分析这12个miRNA在外泌体中的表达,与对照组相比,外泌体组有4个miRNA(miRNA-885、miRNA-21、miRNA-451与miRNA-let-7-5p)表达异常.④外泌体与主动脉内皮细胞(HAEC)共培育后,RT-qPCR检测miRNA表达,与HAEC组相比,只有miRNA-let-7-5p在外泌体与HAEC共培养组中显著表达.⑤生物信息学分析差异miRNA-let-7-5p调控的靶向基因;应用双荧光素酶报告基因实验分析验证miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系,发现TAB2为miRNA-let-7-5p的靶基因.在HAEC中,过表达miRNA-let-7-5p抑制了TAB2的表达.通过查找益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片,发现miRNA-let-7-5p和TAB2均为差异性基因.结论 益气活血化痰方可能通过作用于巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路发挥抗AS作用.
关键词：动脉粥样硬化益气活血化痰方外泌体miRNA-let-7-5pTAB2实验研究
论文发表日期：2022-03-01
页数：6( 835-840 )
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