坎离颗粒抑制血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞肥大的作用机制探究
李悦1
王肖龙2
姚成增2
1.北京中医药大学第三附属医院 北京 1000292.上海中医药大学附属曙光医院 上海 200021
摘要：目的 探究坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9c2心肌细胞肥大的干预作用及机制研究.方法 体外培养H9c2心肌细胞,采用AngⅡ(100 nmol/L)刺激心肌细胞24 h、48 h和72 h,建立心肌细胞肥大模型,利用细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞大小,实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Western Blot)检测心肌细胞中心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及组织金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达水平,确定AngⅡ干预的最佳作用时间.随后将H9c2心肌细胞分别与不同浓度坎离颗粒共同处理,采用CellTiter-Glo?发光法检测坎离颗粒对心肌细胞活力的影响,确定坎离颗粒的安全无毒剂量区间.实验分为空白组、AngⅡ组、坎离颗粒低剂量组、坎离颗粒中剂量组和坎离颗粒高剂量组.采用qRT-PCR和Western Blot检测心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC、MMP-1、MMP-9以及TIMP-1的蛋白表达水平,以观察坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2细胞肥大的干预作用.结果 AngⅡ处理H9c2细胞48 h后,心肌肥大程度最为明显,细胞形态与体积明显增大,且细胞内ANP、BNP、β-MHC、MMP-1、MMP-9以及TIMP-1等肥大基因的mRNA和蛋白表达水平明显增加.坎离颗粒能够抑制AngⅡ诱导的心肌肥大,qRT-PCR与Western Blot法检测结果显示坎离颗粒可明显抑制AngⅡ所诱导的ANP、BNP、β-MHC的mRNA上调;并抑制心肌细胞中MMP-1、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平.结论 坎离颗粒能够明显下调心肌肥大多项指标的基因与蛋白表达水平,揭示坎离颗粒通过抑制肥大因子的上调来拮抗AngⅡ引起的心肌肥大,这可能是坎离颗粒发挥治疗作用的机制之一.
关键词：慢性心力衰竭心肌肥大坎离颗粒H9c2心肌细胞血管紧张素Ⅱ
资助基金：上海市临床重点专科(中医心病科)项目(No.shslczdzk05301)上海市卫生健康委员会项目(No.202040220)蒋梅先上海市名老中医学术经验研究工作室建设项目(No.SHGZS-202249)
论文发表日期：2022-10-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 3560-3566 )
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