RegⅢ γ修饰HuMSCs对柯萨奇B3病毒诱导的心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响
蹇强
李丹
程玮
孙敏
西安市儿童医院 西安 710003
摘要：目的:观察胰岛再生源蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)修饰人脐带间充质干细胞(HuMSCs)对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的小鼠心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响.方法:从新鲜脐带组织中提取HuMSCs,倒置显微镜观察形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达;采用含过表达RegⅢγ的慢病毒感染HuMSCs,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测RegⅢγmRNA表达水平.将40只小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组,每组10只.模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组采用腹腔注射CVB3建立心肌炎模型,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组再分别尾静脉注射HuMSCs、RegⅢγ-HuMSCs.14 d后,采用高分辨率小动物超声成像系统记录小鼠心脏超声指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-23含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡水平,免疫组织化学染色测定心肌组织T淋巴细胞表面抗原(CD4、CD8)和巨噬细胞特异性抗体(CD68)的表达.结果:分离的细胞呈典型纺锤形,细胞表面抗原CD44、CD73、CD90呈高表达,CD34、CD45、人类白细胞抗原-DR蛋白(HLA-DR)呈低表达,说明成功分离到HuMSCs.经过慢病毒感染的HuMSCs有明显绿色荧光蛋白表达,RegⅢγmRNA表达水平高于未感染的细胞(P<0.05),说明成功得到RegⅢγ修饰的HuMSCs.与对照组比较,模型组小鼠射血分数(EF)、缩短分数(FS)降低,左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)升高,血清IL-2、IL-6和IL-23含量增加,IL-4和IL-10含量减少,心肌组织内炎性细胞浸润明显,TUNEL阳性率增加,CD4、CD8及CD68蛋白表达均呈强阳性(P<0.05);与模型组比较,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织炎性细胞浸润减少,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达均下降(P<0.05);相较于HuMSCs组,RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织未见明显炎性细胞浸润,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达下降(P<0.05).结论:RegⅢγ修饰的HuMSCs可减轻CVB3诱导的小鼠心肌炎心肌损伤与炎性细胞浸润,改善心脏功能.
关键词：心肌炎柯萨奇B3病毒胰岛再生源蛋白Ⅲγ人脐带间充质干细胞HuMSCs炎性细胞小鼠实验研究
资助基金：陕西省重点研发计划项目(No.2020SF-103)
论文发表日期：2023-04-16
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1415-1422 )
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