基于miR-126-5p/Bcl-2/mPTP通路探究稳心汤对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤修复的作用机制
解紫从1
刘咏梅1
陈恒文1
谭雨晴2
李军1
1.中国中医科学院广安门医院 北京 1000532.中国中医科学院广安门医院 北京 100053;北京中医药大学 北京 100029
摘要：目的:观察稳心汤对缺氧/复氧诱导的 H9c2 心肌细胞损伤的影响,并基于 miR-126-5p/Bcl-2/心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)调控通路明确其作用机制.方法:使用 5%CO2、1%O2、94%N2 培养箱构建 H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,并通过细胞转染技术达到 miR-126-5p的过表达与抑制.待干预结束后观察心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、心肌细胞活性氧(ROS)含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;流式细胞仪检测心肌细胞线粒体 mPTP 开放水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞色素 C(Cyt-C)释放水平与 Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 miR-126-5p及 Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的 RNA表达水平.结果:与 miR-126-5p低表达组比较,miR-126-5p过表达可显著降低 LDH释放水平;减少心肌细胞 ROS含量;改善心肌细胞凋亡率;提高心肌细胞 CalceinAM水平,减少 mPTP开放.miR-126-5p过表达可以减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平,miR-126-5p低表达可部分减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平.miR-126-5p过表达可上调 Bcl-2蛋白与基因表达,下调 Caspase-3与 Caspase-9 蛋白与基因表达.miR-126-5p低表达可部分上调 miR-126-5p表达水平与 Bcl-2蛋白与基因表达;部分下调 Caspase-3与 Caspase-9蛋白与基因表达.结论:稳心汤改善缺氧/复氧诱导的 H9c2 心肌细胞损伤可能与调控 miR-126-5p/Bcl-2/mPTP信号通路有关,从而减轻氧化应激反应,降低线粒体膜通透性,抑制心肌细胞凋亡,延缓心肌损伤.
关键词：稳心汤H9c2心肌细胞miR-126-5p/Bcl-2/心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)缺氧/复氧心肌损伤
资助基金：国家自然科学基金(No.81973836)中国中医科学院科技创新工程重大攻关项目(No.CI2021A00902)首都卫生发展科研专项(No.2020-1-4151)
论文发表日期：2023-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 2754-2765 )
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