脂蛋白相关性磷脂酶A2促进血管平滑肌细胞泡沫化机制的研究
梁荣珍
王太成
林德文
殷雪娇
林莉
海南医学院第二附属医院 海口 570311
摘要：目的:探究脂蛋白相关性磷脂酶 A2(LP-PLA2)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下的血管平滑肌细胞(VSMC)泡沫化中的作用及其相关分子途径.方法:采用组织块贴壁法分离小鼠原代主动脉 VSMC,α-肌动蛋白(α-SAM)标记的免疫荧光染色进行鉴定;采用脂质体转染技术将过表达LP-PLA2质粒(oe-LP-PLA2)与阴性对照质粒(oe-NC)转染入细胞中,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测转染后细胞中 LP-PLA2 mRNA和蛋白表达水平;采用 ox-LDL和大胞饮抑制剂LY294002处理 VSMC,并将细胞分为 4组,正常培养的control组,ox-LDL处理的转染oe-LP-PLA2细胞的ox-LDL+oe-LP-PLA2组、ox-LDL+oe-NC组、联合使用ox-LDL和LY294002处理的转染oe-LP-PLA2细胞的ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002组.油红O染色检测各组 VSMC中脂质聚积水平,试剂盒检测细胞内总胆固醇含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达水平,DCFH-DA法检测各组 VSMC细胞中活性氧(ROS)含量,Western Blot检测各组细胞中 LP-PLA2和泡沫化信号通路中固醇酰基转移酶 1(ACATl)、细胞外信号调节蛋白激酶 1/2(ERK1/2)和 c-Jun氨基末端激酶(JNK)/应激活化蛋白激酶(SAPK)蛋白的表达水平.结果:成功分离了原代 VSMC,且α-SAM标记的阳性细胞比率达 95%以上;与 control 组比较,转染 oe-LP-PLA2 质粒后细胞中 LP-PLA2 mRNA 和蛋白表达水平均升高(P<0.01);与control组比较,ox-LDL+oe-NC组、ox-LDL+oe-LP-PLA2组和 ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002组细胞的油红 O染色阳性面积、细胞中总胆固醇含量、细胞上清液中 TNF-α、IL-6、MCP-1的表达水平和细胞中活性氧含量均增加(P<0.05或P<0.01);与ox-LDL+oe-NC组比较,ox-LDL+oe-LP-PLA2组油红 O染色阳性面积、细胞中总胆固醇含量、细胞上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1的表达水平和细胞中活性氧含量均增加(P<0.05);与 ox-LDL+oe-LP-PLA2组比较,ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002组中上述检测指标均降低(P<0.05);Western Blot检测结果显示,与 control组比较,ox-LDL+oe-NC组、ox-LDL+oe-LP-PLA2 组和 ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002 组中 LP-PLA2、ACATl、ERK1/2和 JNK/SAPK蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01);与 ox-LDL+oe-NC组比较,ox-LDL+oe-LP-PLA2组 LP-PLA2、ACATl、ERK1/2、JNK/SAPK蛋白表达水平升高(P<0.05),ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002组中除LP-PLA2升高外(P<0.05),其他蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与 ox-LDL+oe-LP-PLA2 组比较,ox-LDL+oe-LP-PLA2+LY294002组细胞中 ACATl、ERK1/2、JNK/SAPK蛋白表达水平均降低(P<0.05).结论:上调 LP-PLA2 表达可通过大胞饮机制促进 ox-LDL作用下的 VSMC的泡沫化进程,而这可能与 ERK和 JNK/SAPK通路的表达上调有关.
关键词：脂蛋白相关性磷脂酶血管平滑肌细胞泡沫细胞氧化型低密度脂蛋白大胞饮小鼠实验研究
资助基金：海南省卫生健康行业科研项目(No.20A200521)
论文发表日期：2023-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2777-2784 )