血管外膜细胞钙化及其钙化机制研究
谭小青
张旭升
樊小容
黄战军
深圳市龙岗区人民医院 广东深圳 518172
摘要：目的:研究经体外诱导钙化建立大鼠血管外膜细胞钙化模型,检测钙化过程中成骨相关指标及凋亡、自噬相关蛋白的表达变化,旨在为心血管疾病模型提供更精确的细胞模型,并初步探讨其钙化机制.方法:原代提取大鼠胸主动脉外膜纤维细胞,取 3～6代细胞使用诱导培养基(高糖 DMEM+10%胎牛血清+10 mmol/Lβ-甘油磷酸+0.05 mmol/L抗坏血酸+100 mmol/L地塞米松)诱导钙化,诱导时间为 3 d、6 d、9 d、12 d、15 d,筛选出诱导细胞钙化的最佳时间.对细胞采用茜素红 S染色、细胞内钙含量测定和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,鉴定是否成功构建钙化模型.采用实时定量聚合酶链式反应(PT-PCR)检测成骨相关因子骨形态生成蛋白 2(BMP2)和核心结合因子α1(Runx2)的 mRNA含量,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白 Bax、Bcl-2和自噬相关蛋白微血管相关蛋白(LC3)、Beclin-1的表达水平,找出血管外膜细胞钙化的潜在机制.结果:当诱导钙化时间为 15d时,血管外膜细胞中主要钙化指标胞内钙含量及 ALP活性上调(P<0.05),茜素红 S染色显示钙化组有明显钙盐沉积.血管外膜细胞经钙化诱导后,BMP2和 Runx2的 mRNA水平上调,Bax蛋白水平上调,Bcl-2 和 Beclin-1 蛋白水平下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调(P<0.05).结论:钙化诱导培养基培养血管外膜细胞 15d可成功构建钙化细胞模型,血管外膜细胞钙化可能与细胞向成骨样表型转化有关,血管外膜细胞钙化过程涉及细胞自噬及凋亡调控.
关键词：血管外膜细胞钙化成骨样表型转化自噬与凋亡实验研究
论文发表日期：2023-09-16
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3347-3350 )
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