基于Klotho/FGF23轴探讨益气活血通络方对高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的影响
李旭峰1
冷冬月2
1.十堰市人民医院(湖北十堰 442000)2.十堰市太和医院(湖北十堰 442000)
摘要：目的:基于 Klotho/成纤维细胞生长因子 23(FGF23)轴探讨益气活血通络方对高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的影响.方法:制备益气活血通络方含药大鼠血清,并提取和培养原代大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs).采用β-甘油磷酸(β-GP)诱导大鼠VSMCs钙化模型,加入不同浓度的益气活血通络方含药大鼠血清进行干预,实验设置 8组:对照组、模型组、益气活血通络方低剂量组(模型+10%含药血清)、益气活血通络方高剂量组(模型+20%含药血清)、益气活血通络方+sh-Klotho组(模型+20%含药血清+ sh-Klotho)、益气活血通络方+阴性对照质粒(sh-NC)组(模型+20%含药血清+sh-NC)、益气活血通络方+成纤维细胞生长因子23基因过表达腺病毒(Ad-FGF23)组(模型+20%含药血清+Ad-FGF23)、益气活血通络方+重组腺病毒空载体(AdLaz)组(模型+20%含药血清+AdLaz).显微镜下观察 VSMCs的形态学变化并采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色鉴定大鼠 VSMCs;细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖情况;茜素红 S染色观察钙结节的形成情况;按照钙离子(Ca2+)浓度及碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测细胞内 Ca2+浓度、ALP活性;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞 Klotho、FGF23、α-SMA、Runt相关转录因子 2(RUNX2)、骨形态发生蛋白-2(BMP2)的 mRNA和蛋白表达.结果:与对照组比较,模型组可见橘红色钙化结节明显增多,钙化结节面积、Ca2+浓度和 ALP活性以及 FGF23、RUNX2、BMP2 的 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),Klotho、α-SMA的 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血通络方低、高剂量组钙化结节明显减少,钙化结节面积、Ca2+浓度和ALP活性以及FGF23、RUNX2、BMP2的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),Klotho、α-SMA的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);而沉默 Klotho或上调 FGF23 的表达能明显逆转益气活血通络方对 VSMCs钙化的作用.结论:益气活血通络方可抑制高磷环境中VSMCs向成骨表型分化,减轻VSMCs的钙化;其作用机制可能与激活Klotho/FGF23轴有关.
关键词：慢性肾病血管钙化血管平滑肌细胞益气活血通络方Klotho/成纤维细胞生长因子23实验研究
论文发表日期：2023-10-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 3532-3539 )
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