蓝萼甲素对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤模型HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响
杜玥
李莎
梅齐建
肖鸣
长江航运总医院(武汉 430010)
摘要：目的:探讨蓝萼甲素(GLA)对缺氧/复氧(H/R)诱导的 H9c2细胞损伤的保护作用以及与高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)/Toll样受体 4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的关系.方法:体外培养H9c2心肌细胞并构建H9c2细胞H/R损伤模型,实验分为 6组:对照组(正常培养)、模型组(构建 H/R细胞模型)、GLA-L组(细胞中加入 5 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-M组(细胞中加入 10 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-H组(细胞中加入 20 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-H+甘草素组(细胞中加入 20μmol/L的GLA和 100μg/mL的HMGB1/TLR4/NF-κB通路抑制剂甘草素后构建H/R细胞模型).CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达.结果:与对照组比较,模型组H9c2细胞存活率和SOD含量明显降低,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量及 HMGB1、TLR4表达与 NF-κB p65磷酸化水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,GLA-L组、GLA-M组、GLA-H组 H9c2细胞存活率和 SOD含量明显升高,细胞凋亡率、LDH、ROS、MDA、TNF-α、IL-6 含量及HMGB1、TLR4表达与NF-κB p65磷酸化水平明显降低,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05).与GLA-H组相比,GLA-H+甘草素组H9c2细胞 HMGB1、TLR4表达与 NF-κB p65磷酸化水平、细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量均进一步下降,细胞存活率和 SOD含量进一步上升,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:GLA可能通过抑制 HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,降低细胞凋亡率,减少炎性因子表达,进而保护 H9c2细胞免受 H/R诱导损伤.
关键词：蓝萼甲素H9c2细胞缺氧/复氧高迁移率族蛋白 B1实验研究
论文发表日期：2023-11-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3936-3940 )