下调miR-31抑制心肌细胞凋亡并防止心肌缺血再灌注损伤的机制研究
樊开凯1
路万里2
阮昕华3
徐亚威1
师强伟1
梁振兴1
1.郑州大学第一附属医院(郑州 450052)2.泰达国际心血管病医院3.天津市人民医院
摘要：目的:探究 microRNA-31(miR-31)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤及大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用.方法:通过inhibitor-miR-31及空病毒载体构建 miR-31低表达心肌细胞,采用 H/R建立心肌细胞损伤模型,缺氧 4h再复氧 2h,采用定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞miR-31 mRNA相对水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)、活化半胱氨酸蛋白酶 3(Cleaved Caspase-3)、活化半胱氨酸蛋白酶 9(Cleaved Caspase-9)、半胱氨酸蛋白酶 9(Caspase-9)、Bcl相关 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达.将 Wistar大鼠分为对照组、MIRI组、MIRI+inhibitor-NC组和 MIRI+inhibitor-miR-31组,每组 24 只,MIRI+inhibitor-NC组和 MIRI+inhibitor-miR-31 组大鼠心肌内注射携带 inhibitor-NC、inhibitor-miR-31的慢病毒载体,7 d后,采用左冠状动脉结扎法构建MIRI模型.慢病毒载体注射后 14 d,超声仪检查大鼠心率(HR)、左心室壁厚度(LVWT)、左心室收缩末期容积(LVESV)和左室射血分数(LVEF),qRT-PCR检测心肌组织miR-31 mRNA相对水平,氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测心脏梗死面积百分比,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理损伤,缺口末端标记法(TUNEL)染色观察心肌组织凋亡率,酶联免疫吸附法检测血清心肌肌钙蛋白-I(cTnI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,Western Blot检测心肌组织凋亡相关蛋白表达.结果:与对照组比较,H/R组心肌细胞 miR-31 mRNA相对水平、细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达升高(P＜0.05),Bcl-2 蛋白表达降低(P＜0.05);与 H/R 组比较,H/R+ inhibitor-miR-31组心肌细胞 miR-31mRNA相对水平、细胞凋亡率和 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05).与对照组比较,MIRI组大鼠心肌组织 miR-31 mRNA相对水平、梗死面积百分比、细胞凋亡率、LVESV和血清 cTnI、CK、CK-MB水平升高(P＜0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达升高(P＜0.05),HR、LVWT、LVEF、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与MIRI组比较,MIRI+inhibitor-miR-31组大鼠心肌组织miR-31 mRNA相对水平、梗死面积百分比、细胞凋亡率、LVESV和血清 cTnI、CK、CK-MB降低(P＜0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达降低(P＜0.05),HR、LVWT、LVEF和 Bcl-2 蛋白表达升高(P＜0.05).结论:抑制 miR-31 表达能通过增强心肌细胞抗凋亡作用,改善心肌缺氧再灌注损伤.
关键词：心肌缺血再灌注损伤心肌细胞损伤microRNA-31细胞凋亡实验研究
资助基金：国家自然科学基金(No.81700236)
论文发表日期：2023-12-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 4308-4315 )
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