微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆模型小鼠脑血管形成及神经损伤的作用研究
林东晓1
陈贞君1
李华1
黄星华2
1.中国人民解放军联勤保障部队第九OO医院仓山院区(福州 350003)2.福建省立医院临床医学实验研究中心
摘要：目的:探究微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆(VD)模型小鼠脑血管形及神经损伤修复的影响.方法:采用超高速离心法提取小鼠脑微血管内皮细胞 bEnd.3的外泌体,透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析(NTA)测定外泌体径粒分布情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标志蛋白 CD63、TSG101、Alix表达;将 40 只小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、外泌体(b-Exo)组、阳性对照(DP)组,每组 10 只,除假手术组,其余 3 组小鼠均采用双侧颈总动脉缩窄法构建 VD模型,b-Exo组腹腔注射 100 μL的 b-Exo(100 μg/mL),DP组腹腔注射盐酸多奈哌齐(1 mg/kg),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,每日 1次,持续 28 d;Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠海马组织病理学变化,免疫荧光染色检测小鼠脑组织血管形成情况,Western Blot检测小鼠海马组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平,免疫荧光染色检测小鼠海马组织中神经元特异核蛋白(NeuN)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清脑损伤相关因子星形胶质源性蛋白(S-100β)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平.结果:从 bEnd.3 细胞分离的颗粒物呈圆形囊泡状,CD63、TSG101及 Alix蛋白均高表达,说明该颗粒物为外泌体,记为 b-Exo;与假手术组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比减少,海马 CA1 区神经元细胞数量减少,出现明显病理学损伤,血管形成减少,VEGF蛋白相对表达量下调,NeuN表达减少,血清 S-100β与 NSE水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,b-Exo组和 DP组小鼠逃避潜伏期缩短,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比增加,海马 CA1区损伤明显减轻,神经元细胞数量有所增加,血管形成增加,VEGF蛋白相对表达量上调(P<0.05),NeuN表达增加,同时,血清中 S-100β与 NSE水平降低(P<0.05).结论:微血管内皮细胞来源的外泌体能明显促进 VD小鼠的血管形成,并修复神经损伤,对 VD小鼠起到治疗作用.
关键词：血管性痴呆微血管内皮细胞外泌体血管形成神经保护实验研究
资助基金：福建省自然科学基金项目(No.2020J05283)中国人民解放军联勤保障部队第九OO医院院内课题杰青项目(No.2021JQ12)
论文发表日期：2024-04-16
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1409-1415 )
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