CircACAP2靶向miR-29a-3p/CCNT2轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响
屈苗1
关欣2
1.宝鸡市中心医院(陕西宝鸡 721000)2.西咸新区中心医院/陕西中医药大学第二附属医院(西安 712000)
摘要：目的:探讨 CircACAP2靶向 miR-29a-3p/细胞周期蛋白 T2(CCNT2)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响.方法:将 H9c2细胞分为Control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、Model组(建立H/R模型)、si-CircACAP2组(转染si-CircACAP2)、si-CircACAP2+inhibitor-NC组(si-CircACAP2和inhibitor-NC共转染)、si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组(si-CircACAP2和miR-29a-3p inhibitor共转染);实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 H9c2 细胞中 CircACAP2、miR-29a-3p的表达水平;四唑盐(MTT)法检测 H9c2 细胞活力;流式细胞仪检测 H9c2 细胞凋亡;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测 H9c2 细胞自噬;乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测 H9c2细胞上清中 LDH、MDA、SOD水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白(Beclin-1、P62)及 CCNT2 的表达;双荧光素酶报告检测 CircACAP2 对 miR-29a-3p的靶向关系和 miR-29a-3p对 CCNT2的靶向关系.结果:与 Control组比较,Model组 H9c2 细胞中 CircACAP2 表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2 蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490 值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62 蛋白表达降低(P<0.05);与 Model 组比较,si-CircACAP2 组 H9c2 细胞中 CircACAP2 表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH 释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达降低,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达升高(P<0.05);与si-CircACAP2组比较,si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组 H9c2细胞中 CircACAP2表达差异无统计学意义(P>0.05),凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2 蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);CircACAP2 靶向调控 miR-29a-3p 的表达,miR-29a-3p 靶向负调控 CCNT2 的表达.结论:敲低CircACAP2可能通过靶向miR-29a-3p来下调CCNT2表达,进而抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡、自噬能力及氧化应激,促进细胞增殖,发挥保护作用.
关键词：缺氧/复氧CircACAP2miR-29a-3p/细胞周期蛋白T2轴心肌细胞实验研究
论文发表日期：2024-09-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 3128-3135 )
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