LncRNA SNHG14调控miR-506-3p/Beclin-1通路介导心肌缺血再灌注的分子机制
李小玲1
孙江滨1
陆增学2
陈润奇1
杨涛1
1.桂林市人民医院 桂林 5410022.兴安县人民医院
摘要：目的:探讨长链非编码RNA(LncRNAs)核内小RNA宿主基因14(SNHG14)调控miR-506-3p/Beclin-1通路介导心肌缺血再灌注损伤的潜在机制.方法:结扎冠状动脉左前降支(LAD)构建小鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤模型并转染后,分为sham组、I/R组、I/R+si-NC 组和 I/R+si-SNHG14 组;sham 组、I/R 组、I/R+NC mimic 组和 I/R+miR-506-3p mimic 组.构建缺氧/复氧(H/R)模型并转染后,将 H9c2 细胞分为对照组、H/R 组、H/R+si-NC 组、H/R+si-SNHG14 组;control 组、H/R 组、H/R+NC mimic 组和 H/R+miR-506-3p mimic 组;H/R+si-SNHG14+miR-506-3p mimic 组、H/R+si-SNHG14+miR-506-3p inhibitor 组、H/R+si-SNHG14+miR-506-3p inhibitor+si-Beclin-1 组和 H/R+si-SNHG 14+miR-506-3p mimic+ov-Beclin-1 组;共转染 NC mimic和野生型 SNHG14(WT-SNHG14)组、共转染 NC mimic和突变型 SNHG14(MUT-SNHG14)组、共转染 miR-506-3p mimic和 WT-SNHG14组及共转染 miR-506-3p mimic和 MUT-SNHG14组;共转染 NC mimic和野生型 Beclin-1(WT-Beclin-1)组、共转染 NC mimic和突变型 Beclin-1(MUT-Beclin-1)组、共转染 miR-506-3p mimic和 WT-Beclin-1 组及共转染 miR-506-3p mimic和 MUT-Beclin-1 组.采用 2,3,5 三苯基四唑氯(TTC)染色测定心肌梗死面积;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;细胞计数盒(CCK-8)试剂盒检测细胞活力;膜联蛋白V-碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色试剂盒检测细胞凋亡;逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG14、miR-506-3p和Beclin-1表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Bax、Bcl-2和Beclin-1表达水平;StarBase软件预测miR-506-3p的上游和下游结合靶点;荧光素酶报告系统检测SNHG14与miR-506-3p、miR-506-3p与Beclin-1的靶向关系.结果:在体内,与sham组比较,I/R组心肌梗死面积增大(P＜0.001),转染si-SNHG14或miR-506-3p mimic可减小心肌梗死面积(P＜0.001).在体外,与对照组比较,H/R组细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平及Beclin-1基因和蛋白表达水平均升高(P＜0.001),细胞活力和Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.001);转染si-SNHG14或miR-506-3p mimic均可逆转上述指标的变化.转染si-SNHG14后,miR-506-3p表达升高(P＜0.001).与sham组、对照组比较,I/R组、H/R组SNHG14表达水平、CK-MB和LDH水平均升高(P＜0.001),miR-506-3p表达水平下降(P＜0.001);转染si-SNHG14或miR-506-3p mimic均可逆转可上述指标的变化.与共转染NC mimic和WT-SNHG14组、共转染NC mimic和MUT-SNHG14组及共转染 miR-506-3p mimic和 MUT-SNHG14组;共转染 NC mimic和 WT-Beclin-1 组、共转染 NC mimic和 MUT-Beclin-1 组及共转染miR-506-3p mimic 和 MUT-Beclin-1 组比较,共转染 miR-506-3p mimic 和 WT-SNHG14 组及 miR-506-3p mimic 和 WT-Beclin-1 组双荧光水平降低(P＜0.001).与 H/R+si-SNHG14+miR-506-3pinhibitor组比较,H/R+si-SNHG14+miR-506-3p inhibitor+si-Beclin-1 组细胞凋亡率、Bax和Beclin-1蛋白表达水平及LDH和CK-MB水平均下降,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达水平均升高;与H/R+si-SNHG14+miR-506-3p mimic 组比较,H/R+si-SNHG 14+miR-506-3p inhibitor+ov-Beclin-1 组细胞凋亡率、Bax 和 Beclin-1 蛋白表达水平 LDH 和 CK-MB 水平均升高,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达水平均下降.结论:LncRNA SNHG14/miR-506-3p/Beclin-1轴可能是治疗心肌缺血再灌注损伤的关键通路.
关键词：心肌缺血再灌注损伤长链非编码RNA核内小RNA宿主基因14miR-506-3pBeclin-1小鼠实验研究
资助基金：桂林市科学研究与技术开发计划(No.2020011207-10)广西壮族自治区卫生健康委员会科研课题(No.Z20210543)广西壮族自治区卫生健康委员会科研课题(Z20200826)
论文发表日期：2025-05-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：16( 1499-1514 )
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