METTL14介导的m6A甲基化调控SIRT6在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制研究
何娟
黄敏
谢爱萍
何秀波
长沙市第四医院(长沙 413000)
摘要：目的:探讨甲基转移酶样蛋白14(METTL14)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化调控沉默信息调节因子6(SIRT6)干预小鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用机制.方法:选取健康C57BL/6小鼠60只,采用冠状动脉结扎法建立心肌I/R损伤模型,构建METTL14的过表达质粒及阴性对照[磷酸化METTL14(p-METTL14)、p-NC]、SIRT6的siRNA及阴性对照(si-SIRT6、si-NC),以慢病毒包装后采用尾静脉注射的方式于小鼠体内分别过表达或抑制 METTL14 及 SIRT6,随机分为假手术组(Sham 组)、模型组(I/R组)、p-METTL14组、p-NC组、p-METTL14+si-SIRT6、p-METTL14+si-NC组,每组10只.采用动物超声心动图系统评估小鼠心功能变化,伊文思蓝/2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定小鼠心肌梗死面积,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡水平,m6A甲基化免疫共沉淀(MeRIP)-聚合酶链式反应(qPCR)法检测小鼠心肌组织中SIRT6 mRNA表达水平及其m6A甲基化水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)实验检测心肌组织线粒体中的自噬标志蛋白表达.结果:与Sham组相比,I/R组小鼠左心室射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)和心肌组织中SIRT6 mRNA、心肌组织中肥胖相关蛋白(FTO)、甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、ALKB同系物5(ALKBH5)表达均明显降低,心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率及心肌组织线粒体帕金森病蛋白(Parkin)、PENT 诱导激酶 1(PINK1)蛋白相对表达量、灰度值均明显升高(P＜0.05);与 I/R 组相比,p-METTL14组、p-METTL14+si-SIRT6组小鼠EF、FS及心肌组织中SIRT6 mRNA表达均明显升高,心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、FTO、METTL3、ALKBH5和心肌组织线粒体中Parkin、PINK1 蛋白相对表达量、灰度值均明显降低,且p-METTL14+si-SIRT6 组优于p-METTL14组(P＜0.05).结论:METTL14对小鼠I/R损伤具有保护作用,其可能通过增强SIRT6的m6A甲基化修饰改善小鼠心功能,缩小心肌梗死面积、抑制心肌细胞凋亡并促进心肌细胞线粒体自噬,减轻小鼠心肌I/R损伤.
关键词：心肌缺血再灌注损伤甲基转移酶样蛋白14沉默信息调节因子6N6-甲基腺苷RNA甲基化线粒体自噬实验研究
论文发表日期：2025-06-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1658-1665 )
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