基于mTOR通路探讨雷帕霉素对高磷诱导的大鼠血管外膜细胞向成骨样细胞表型转化的影响
樊小容
张旭升
谭小青
彭俊
深圳市龙岗区人民医院(广东 深圳 518172)
摘要：目的:基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探讨雷帕霉素对高磷诱导的大鼠血管外膜细胞向成骨样细胞表型转化的影响.方法:提取原代大鼠血管外膜成纤维细胞.采用钙化培养基(高糖DMEM+10%胎牛血清+10 mmol/L β-甘油磷酸钠+0.05 mmol/L 抗坏血酸+100 mmol/L 地塞米松)诱导大鼠血管外膜细胞钙化模型,通过测定细胞内钙含量、碱性磷酸酶(ALP)活性以及茜素红染色观察钙结节等方法评估细胞钙化情况.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测成骨相关分子核心结核因子α1(Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)及mTOR通路关键蛋白磷酸化mTOR(p-mTOR)的mRNA及蛋白表达水平.结果:与对照组相比,造模组胞内钙含量、ALP活性升高(P＜0.05).茜素红染色结果显示,造模组可见大量橘红色钙化结节,而对照组完全没有.RT-qPCR及Western Blot检测结果显示,与对照组比较,造模组Cbfα1及 BMP2 mRNA及蛋白表达量上调(P＜0.05),p-mTOR蛋白表达量升高(P＜0.05).与造模组相比,雷帕霉素高浓度组、低浓度组Cbfα1及 BMP2 mRNA表达水平下调,Cbfα1、BMP2及p-mTOR蛋白表达量减少(P＜0.05),且具有剂量依赖性.茜素红染色结果显示,雷帕霉素高浓度组、低浓度组钙结节大小及数量均比造模组有所减少.结论:雷帕霉素可抑制高磷诱导的大鼠血管外膜细胞向成骨化表型转化,减轻细胞钙化,其机制可能与抑制mTOR通路有关.
关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白血管外膜细胞雷帕霉素核心结核因子α1骨形态发生蛋白2实验研究
论文发表日期：2025-10-10
在线出版日期：2025-10-24（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2949-2954 )
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