活血荣络方联合依达拉奉右莰醇调控线粒体自噬-NLRP3炎症小体减轻HCMEC/D3损伤的作用机制
苏啟后1
李中2
周德生2
张宇星2
唐宁2
曾富康2
1.深圳市宝安区中医院(广东 深圳 518133)2.湖南中医药大学第一附属医院(长沙 410007)
摘要：目的:探讨活血荣络方联合依达拉奉右莰醇干预线粒体自噬-NOD样受体家族Pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体途径对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)的作用机制.方法:通过体外实验,将HCMEC/D3分为正常组、模型组、活血荣络方组、依达拉奉右莰醇组和联合用药组.通过查询资料,明确最佳造模时间,采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力,明确最佳用药浓度与最佳药物组合.明确最佳造模时间、用药浓度及最佳药物组合后,观察体外实验研究对自噬通路PTEN诱导的激酶1(PINK1)/Parkin和炎症通路NLRP3/Caspase-1蛋白表达的影响.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测药物对细胞上清液炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平的影响;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测药物对自噬通路PINK1/Parkin mRNA的表达影响;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测药物对自噬通路PINK1/Parkin mRNA与NLRP3/Caspase-1表达的影响.结果:依达拉奉右莰醇注射液原液可抑制HCMEC/D3活力(P＜0.05或P＜0.01);依达拉奉右莰醇注射液以20 mL/L效果最佳,确定20 mL/L为最佳用药浓度.CCK8法结果显示,与模型组比较,活血荣络方组、依达拉奉右莰醇组、联合用药组HCMEC/D3细胞活力升高(P＜0.01);与活血荣络方组比较,联合用药组促进HCMEC/D3细胞活力升高(P＜0.01);与依达拉奉右莰醇组比较,联合用药组HCMEC/D3细胞活力升高(P＜0.01).确认了联合用药组为实验研究的最佳药物组合.与正常组比较,模型组炎性因子IL-1β、IL-18、PINK1/Parkin mRNA表达量,炎症通路NLRP3/Caspase-1蛋白表达量,自噬通路PINK1/Parkin蛋白表达量升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,联合用药组炎性因子IL-1β、IL-18水平下降,自噬抑制组炎性因子水平升高;联合用药组PINK1/Parkin mRNA表达量升高(P＜0.05),自噬抑制剂组PINK1/Parkin mRNA表达量降低(P＜0.01);联合用药组炎症通路NLRP3/Caspase-1蛋白表达量降低(P＜0.05),自噬通路PINK1/Parkin蛋白表达量升高(P＜0.05或P＜0.01),自噬抑制剂组炎症通路NLRP3/Caspase-1蛋白表达量升高(P＜0.05),自噬通路PINK1/Parkin蛋白表达下降(P＜0.05).结论:依达拉奉右莰醇联合活血荣络方可能通过促进线粒体自噬负性调控NLRP3炎症小体活化,进而发挥神经保护作用.
关键词：脑缺血再灌注损伤人脑微血管内皮细胞活血荣络方依达拉奉右莰醇线粒体自噬NOD样受体家族Pyrin结构域蛋白3炎症小体实验研究
资助基金：深圳市宝安区区属公立医院高质量发展研究项目(No.BAGZL2024086)深圳市宝安区医疗卫生科研项目(No.2024JD113)中国卒中学会脑血管病全程管理项目(No.CSA-SF-2021-03)湖南中医药大学校级科研基金项目(No.2021XJJJ039)
论文发表日期：2026-01-25
在线出版日期：2026-02-04（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 212-219 )
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