DOI: 10.12187/2020.03.001
果糖基转移酶AoFT
在毕赤酵母中的表达与纯化及其酶学性质研究
魏涛1
赵彩梦2
郏未未2
黄申2
毛多斌1
1.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州450001;河南省食品生产与安全协同创新中心,河南郑州4500012.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州450001
摘要：利用基因工程技术方法,将构建的重组质粒pPICZαA-AoFT线性化后,经电转化导入毕赤酵母X33(Pichia pastoris X33)中,构建重组毕赤酵母工程菌pPICZαA-AoFT/X33,实现果糖基转移酶AoFT在毕赤酵母中的表达,进而研究纯化后的果糖基转移酶AoFT的酶学性质.结果表明:pPICZαA-AoFT/X33随发酵时间的增加而快速繁殖,菌体OD600值于发酵时长120 h时达到峰值,此时发酵液胞外总蛋白质量浓度为1.64 mg/mL;纯化后的果糖基转移酶AoFT的比活力为71.4 U/mg,产率达70.6％;PNGase F酶切反应证实纯化后的果糖基转移酶AoFT发生了N-糖基化反应;果糖基转移酶AoFT的最适反应温度为45℃,最适缓冲体系为醋酸钠缓冲液(pH值为4.5～6.0);金属离子Mn2+,Ca2+对果糖基转移酶AoFT具有激活作用,而Al3+,Fe2+,Ni2+,Zn2+和EDTA对果糖基转移酶AoFT具有抑制作用;表面活性剂SDS,吐温20和Triton X-100对果糖基转移酶AoFT的酶活性影响较小,还原剂DTT对果糖基转移酶AoFT的酶活性具有明显的抑制作用,酶抑制剂PMSF低浓度时对果糖基转移酶AoFT的酶活性无显著影响,高浓度时可使酶活性降低;果糖基转移酶AoFT对有机溶剂乙醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、正丁醇、正己烷和甲苯具有较强的抗性.
关键词：果糖基转移酶毕赤酵母表达纯化酶学性质
分类号：TS41+3(烟草工业)
资助基金：国家自然科学基金(21406210)河南省高等学校科技创新人才项目(18HASTIT040)留学人员科技活动项目(2019-3)
论文发表日期：2020-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 1-10 )
英文信息