DOI: 10.12187/2020.04.002
基于易错PCR的β-甘露聚糖酶体外分子定向进化研究
胡海艳
甘祥武
黄秀敏
叶俊豪
谢万勇
1.广州市微生物研究所,广东广州5106632.广州市微生物研究所,广东广州5106633.广州市微生物研究所,广东广州5106634.广州市微生物研究所,广东广州5106635.广州市微生物研究所,广东广州510663
摘要：采用易错PCR方法,对β-甘露聚糖酶进行体外分子定向进化,通过调整dNTP比例和加入不同浓度的Mn2+,向β-甘露聚糖酶中随机引入突变,构建突变文库,并对筛选得到的突变菌株的突变酶酶学性质进行研究.结果表明:在突变文库的构建过程中,当Mn2+浓度为0.01 mmol/L时,阳性转化率最高,达到80％,氨基酸的突变个数为2.0个,符合易错PCR突变文库的构建原则;经过两轮易错PCR构建的突变文库库容量约为4000,从中筛选出的突变毕赤酵母菌X-33/pGAPZαA-GwMan26 A-27的突变酶GwMan26 A-27具有耐酸、耐高温且酶活力较高的特性;与突变前相比,GwMan26 A-27具有较宽的酶促反应温度范围和适宜pH值范围,热稳定性和pH稳定性均有较大提升;在胃蛋白酶液和胰蛋白酶液中水浴2 h,GwMan26A-27的消化酶稳定性较突变前也均有所提升.
关键词：β-甘露聚糖酶易错PCR定向进化
分类号：TS201.3(食品工业)Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广州市科技计划项目(201710010154)
论文发表日期：2020-08-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 8-15 )
英文信息