新型冠状病毒N蛋白的原核表达与纯化
樊志浩1
李玉林2
张恒3
王旭东3
王云龙4
1.郑州大学 生命科学学院,河南 郑州450001;河南省生物工程技术研究中心,河南 郑州4501212.河南省生物工程技术研究中心,河南 郑州4501213.河南省职工医院,河南 郑州4500024.郑州大学 生命科学学院,河南 郑州450001;河南省生物工程技术研究中心,河南 郑州450121;郑州职业技术学院 生物工程系,河南 郑州450121
摘要：采用生物信息学方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N蛋白)进行亲疏水性、抗原表位预测及多序列对比分析,构建重组质粒pET28a/N,在大肠杆菌原核表达体系下通过调整诱导温度和时间,提升蛋白溶解度和表达量,并对表达出的重组N蛋白进行纯化和鉴定.结果表明:SARS-CoV-2 N蛋白编码419个氨基酸,等电点(PI)为10.10,无跨膜区,无信号肽序列,局部亲水性较强,全长蛋白抗原指数较高,高度保守,与SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白同源性为90.5％;采用大肠杆菌原核表达体系发酵,工程菌BL21(DE3)/pET28a/N在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、16℃低温条件下诱导20 h,蛋白呈可溶性表达,且此时蛋白的表达量最高,占总蛋白表达量的70％;通过Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析纯化后的目的蛋白纯度达90％,分子质量为55 kDa,具有特异性.
关键词：新型冠状病毒N蛋白抗原表位可溶性表达
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：河南省新型冠状病毒防控应急科研攻关项目(201100310300)
论文发表日期：2022-08-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 34-40 )
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