低剂量甲氨蝶呤激活Notch-1/Hey-1通路促进大鼠脊髓损伤神经功能恢复
刘思航
陶周善
杨民
程昌锦
谢加兵
朱劲松
皖南医学院第一附属医院(弋矶山医院)创伤骨科,安徽 芜湖 241000
摘要：目的 探讨低剂量甲氨蝶呤(MTX)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经功能恢复的影响及作用机制.方法 36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MTX组和甲基强的松龙(MP)组,各9只,使用环扎法(实现70％的截面压缩)构建大鼠SCI模型.所有大鼠术后24 h内首次给药,MTX组和MP组分别给予MTX(0.5 mg/kg、qw)和MP(30 mg/kg、qw)治疗,模型组及假手术组均予以磷酸盐缓冲液(200 µl、qw)注射.术后3、14、21 d使用BBB评分和斜板评分评估大鼠后肢运动功能,HE染色评估脊髓组织病理改变,TUNEL检测观察SCI区域脊髓组织的凋亡细胞变化;免疫组化(IHC)检测大鼠SCI区域Notch-1、Bcl-2表达,蛋白免疫印迹法(WB)、反转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SCI区域组织相关蛋白和基因Notch-1/Hey-1和Bcl-2表达.结果 MP组与模型组BBB评分比较,大鼠减压术后3 d[(7.2±0.2)分vs.(3.6±0.2)]分、14 d[(12.3±0.4)分 vs.(5.1±0.3)分]、21 d[(15.3±0.7)分 vs.(7.1±0.5)分]评分均升高(P＜0.05);MTX 组与模型组 BBB 评分比较,大鼠减压术后 3 d[(6.4±0.4)分 vs.(3.6±0.2)分]、14 d[(11.7±0.4)分 vs.(5.1±0.3)分]、21 d[(15.4±0.5)分vs.(7.1±0.5)分]评分均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).斜板评分与BBB评分显示出相同的趋势.与模型组比较,HE组织切片显示MP组和MTX组的SCI区域组织坏死较少.TUNEL结果显示MP组和MTX组的SCI区域组织细胞凋亡数量较模型组在各个时间段均出现明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);IHC结果显示,与模型组相比,在术后3、14、21 d SCI大鼠脊髓组织样本中,MP组及MTX组中Bcl-2、Notch-1阳性细胞数量均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blot和PCR检测结果发现,同模型组相比,MP组和MTX组在各个时间段Notch-1、Hey-1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低剂量的MTX使用对SCI后大鼠神经功能起到保护作用,初步发现这种作用可能与激活Notch-1/Hey-1通路有关.
关键词：脊髓损伤甲氨蝶呤甲泼尼龙治疗机制分子通路
分类号：R651.2(外科学各论)
资助基金：芜湖市科技成果转化项目(2021cg16)皖南医学院重点科研培育基金(WK2020ZF20)安徽省临床医学研究转化研究项目(202304295107020007)
论文发表日期：2025-04-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 292-300,307 )
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