miR-181d靶向CREB1对5-氟尿嘧啶治疗结肠癌细胞敏感性的影响
刘红1
农菲菲2
邓舒烨1
1.广西中医药大学第一附属医院医学分子生物学实验室(广西南宁 530023)2.广西中医药大学第一附属医院医学分子生物学实验室(广西南宁 530023);广西中医药防治医学分子生物
摘要：目的 利用簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)文库筛选5-氟尿嘧啶(5-Fu)治疗结肠癌敏感性关键基因,并探索关键基因microRNA-181d(miR-181d)的表达对5-Fu治疗结肠癌敏感性的影响.方法 在结肠癌细胞Ls174t中建立全基因组CRISPR/Cas9基因敲除筛选系统,利用生物信息学分析发现miR-181d是5-Fu治疗结肠癌敏感性的关键基因.采用敲除miR-181d和miR-181d抑制剂(miR-181d inhibitor)降低miR-181d的表达,检测结肠癌细胞在5-Fu治疗下的存活和凋亡情况.采用miR-181d模拟物(miR-181d mimic)进行过表达miR-181d,同样检测细胞在5-Fu治疗下的存活和凋亡情况.使用双荧光素酶报告基因实验和Western blot鉴定miR-181d的潜在靶基因CAMP反应元件结合蛋白 1(CAMP responsive element binding protein 1,CREB1).Western blot 检测 CREB1、JUN、FOS蛋白表达水平.结果 CRISPR/Cas9文库筛选结果发现靶向miR-181d的sgRNAs在5-Fu处理的细胞中富集.与对照组相比,敲除miR-181d和miR-181d inhibitor分别促进5-Fu处理的结肠癌细胞的存活并减少细胞凋亡(P＜0.05);miR-181d mimic则抑制细胞存活(P＜0.05),并促进细胞凋亡(P＜0.05).Western blot法和双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-181d靶向调控CREB1,且过表达CREB1后显著增强结肠癌细胞的存活(P＜0.05),以及抑制细胞凋亡(P＜0.05),同时促进JUN、FOS蛋白表达(P＜0.05).过表达miR-181d后可下调CREB1表达,并抑制JUN、FOS蛋白表达(P＜0.05).结论 miR-181d通过靶向下调CREB1,抑制JUN/FOS信号通路,降低细胞存活,促进细胞凋亡,从而增强5-Fu的敏感性.miR-181d可能是一种增强5-Fu化学敏感性的治疗新策略.
关键词：miR-181d5-氟尿嘧啶敏感性CAMP反应元件结合蛋白1结肠癌
分类号：R735.3(消化系肿瘤)R73-36(肿瘤学实验研究)
资助基金：广西高校中青年教师科研基础能力提升项目(2022KY0280)广西高校中青年教师科研基础能力提升项目(2023KY0308)
论文发表日期：2025-12-15
在线出版日期：2026-01-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 1826-1834 )
英文信息