利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株
温后烺1
陈婧1
曾杰清1
彭流泉1
陈日玲1
马国达1
张海涛2
汪亚君1
1.广东医科大学顺德妇女儿童医院,广东佛山 5283002.广东医科大学生化教研室,广东湛江 524023
摘要：目的 构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响.方法 设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定;对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测.结果 目标质粒测序符合,质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰,获得SIRT1基因敲除的单克隆3个,SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓.结论 成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株,该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具.
关键词：CRISPR-Cas9SIRT1基因敲除K562细胞增殖
分类号：Q291(细胞生物学)
资助基金：国家自然科学基金(81770034)广东省基础与应用基础研究基金(2022A1515140167)广东医科大学顺德妇女儿童医院博士启动项目(2021BSQD001)
论文发表日期：2023-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 504-508,514 )
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