高毒力肺炎克雷伯菌wzc基因敲除株的构建及其生物学特性分析
王庆1
杨蕊1
曾洁1
余泓鹏1
陆守一1
梁馨云1
林华胜1
张薇1
金敏2
李璐1
赵祖国1
1.广东医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,广东 东莞 5238082.中国人民解放军军事医学科学院,北京 100039
摘要：目的 构建高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)KPN234的wzc基因敲除株,研究wzc基因对细菌荚膜及毒力的影响.方法 设计靶向wzc中的sgRNA,构建CRISPR/Cas9基因敲除载体并采用电击转KPN234,经安普霉素和卡那霉素双抗筛选及质粒丢失后,获得wzc基因敲除株;采用PCR及全基因组测序确认基因敲除及无脱靶后,Western blot确认敲除菌株不再表达Wzc蛋白.绘制wzc基因敲除菌株的生长曲线,以判断基因敲除对细菌生长的影响.采用拉丝、黏度半定量、荚膜多糖定量试验评估基因敲除对细菌荚膜多糖合成的影响;以大蜡螟幼虫感染试验评估细菌的毒力.结果 经基因敲除操作后,hvKP KPN234丢失了wzc基因,且并未发生其他位点突变,表明基因敲除成功.wzc基因敲除株菌落黏液性和荚膜多糖合成能力显著降低(P<0.001),大蜡螟幼虫感染试验显示wzc基因敲除株的毒力显著降低(P<0.001).结论 成功构建了hvKP wzc基因敲除株,为进一步研究wzc基因在hvKP的作用机制奠定了基础.
关键词：CRISPR-Cas9肺炎克雷伯菌wzc基因敲除
资助基金：广东省自然科学基金面上项目(2024A1515012577)广东省普通高校特色创新项目(2023KTSCX039)广东省医学科研基金项目(B2023417)广东医科大学青年科研培育基金(GDMUQ2022012)广东医科大学青年科研培育基金(GDMUQ2021024)
论文发表日期：2026-02-28
在线出版日期：2026-01-28（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 29-36 )
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