咖啡豆α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌JM83中可溶性表达、纯化及活性检测
崔玉
杨军
詹林盛
1.军事医学科学院野战输血研究所,北京,1008502.军事医学科学院野战输血研究所,北京,1008503.军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850
摘要：目的:初步证实咖啡豆α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌JM83中可溶性表达、纯化及活性.方法:通过PCR扩增得到咖啡豆α-半乳糖苷酶基因克隆到载体pGEM-T easy,目的片段与预期的大小一致.咖啡豆α-半乳糖苷酶基因与分泌性原核表达载体pAS18连接,转化到宿主菌E.coli JM83.经过IPTG诱导表达并通过SDS-PAGE电泳分析,Western-blot印迹证实蛋白表达的特异性.结果:PCR扩增得到目的片段测序结果正确.SDS-PAGE电泳分析得到目的蛋白41 kD,经过Western blot鉴定正确.ELISA检测证实咖啡豆α-半乳糖苷酶具有生物活性.结论:优化诱导条件,初步证实重组咖啡豆α-半乳糖苷酶基因具有生物活性.
关键词：α-半乳糖苷酶表达活性
分类号：R9(药学)
资助基金：国家自然科学基金(30371330)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 75-78 )
英文信息