脂肪组织来源干细胞的成骨诱导和外源性基因转染表达研究
黄宏
张波
朱方强
孙宏振
冯帅南
王正国
朱佩芳
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000422.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000423.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000424.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000425.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000426.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000427.第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042
摘要：目的:探讨脂肪组织来源的干细胞(ADSCs)表达外源性基因的可能性.方法:取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等方法分离培养ADSCs,再经原代培养和传代培养.利用成骨诱导剂(10-7mol/L地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸钠和50 mg/L左旋抗坏血酸)诱导ADSCs向成骨方向分化,观察其生长形态,并通过Gomori改良钙钴法和yon Kossa染色对其成骨表型进行鉴定.另设一对照组.培养基中不加入成骨诱导剂.脂质体介导人内皮细胞生长因子(hVEGF)和骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)转染ADSCs细胞.观察转染后细胞形态和生长情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法分别检测hVEGFmRNA,BMP-2 mRNA及其蛋白质表达.结果:成骨诱导剂能显著诱导体外培养的ADSCs向成骨细胞分化,诱导19d的ADsCs体积增大,细胞由梭形变为多边形,Gomori改良钙钴法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒,诱导15d和19 d,碱性磷酸酶阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%.von Kossa染色表明聚集的细胞团中央有钙化结节形成.RT-PCR检测证实.经质粒转染的ADSCS中hVEGF和hBMP-2基因表达明显增强,对照组呈弱表达.免疫组织化学检测证实转染ADSCs内有棕色的阳性颗粒出现,未转染细胞则呈现阴性.结论:ADSCs能被成功诱导为成骨细胞,hVEGF和hBMP-2基因能成功地转入ADSCs并表达,这为促进骨组织工程的血管化和成骨活性奠定了基础.
关键词：脂肪组织干细胞内皮细胞生长因子骨形态发生蛋白-2细胞转染基因表达
资助基金：国家重点基础研究发展规划项目(2005CB522603)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 77-81,封3 )
英文信息