Wistar大鼠smad3 cDNA序列测定及其mRNA水平实时荧光定量PCR检测方法的建立
李平
熊仁平
刘苹
赵艳
朱敏
周元国
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000422.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000423.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000424.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000425.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000426.第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042
摘要：目的:克隆和测定Wistar大鼠smad3基因部分序列,构建检测Wistar大鼠smad3基因表达的重组质粒标准品并建立实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法.方法:提取并培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞的总RNA,逆转录(RT)-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18 T载体上,测序分析.用已测定序列的T载体作为标准品建立实时荧光定量PCR方法,并检测转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激对培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3 mRNA表达的影响.结果:测定Wistar大鼠smad3基因cDNA序列长415 bp,其与人、家鼠、小鼠具有较高的同源性,已被GenBank收录(DQ409172).建立的实时荧光定量PCR方法在103～107拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内相关系数为0.989 46.25 ng/ml TGF-β1刺激后Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3基因表达升高为PBS刺激对照组的1.5倍.结论:获得Wistar大鼠smad3基因序列并成功建立了smad3实时荧光定量PCR的方法,为Smad3作用的分子机制研究提供了实验基础.
关键词：smad3基因克隆序列分析定量聚合酶链式反应
资助基金：国家自然科学基金(30400468)国家重点基础研究发展计划（973计划）(G1999054205,2005CB22602)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 82-86 )
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