光滑假丝酵母菌感染实时荧光定量PCR检测方法的建立
龙燕1
郑磊2
曾方银2
王前2
1.南方医科大学南方医院检验医学中心,广东广州510515;广州市妇女儿童医疗中心检验部,广东广州5106232.南方医科大学南方医院检验医学中心,广东广州,510515
摘要：目的:建立、优化快速检测临床标本中光滑假丝酵母菌的实时荧光定量PCR方法,并评价其临床应用价值.方法:以光滑假丝酵母菌ITSⅡ基因的一段高度保守序列为扩增靶序列,合成引物和探针,并与pMD19-T构建重组质粒作为标准品,建立检测光滑假丝酵母菌的实时定量荧光PCR方法.从线性范围、重复性、敏感性、特异性等4个方面对反应体系进行方法学评价.用建立的实时荧光定量PCR方法对1 042例临床标本(包括血液、尿液、痰液、胸水、支气管肺泡灌洗液)进行检测,并与真菌培养法进行比较.结果:建立的光滑假丝酵母菌实时荧光定量PCR方法的灵敏度可达10 CFU/ml；与人类基因组、细菌及其他真菌无交叉阳性反应.重复检测样本,其循环阈值的试验内及试验间变异系数均小于10％.用于临床标本检测时共检出96份阳性标本,与真菌培养法(检出93份阳性标本)的一致性好(Kappa值为0.925).结论:实时荧光定量PCR方法检测光滑假丝酵母菌灵敏度高、特异性及重复性好；可直接用于各种临床标本中光滑假丝酵母菌的检测,能大大缩短报告时间,为临床诊断提供可靠依据.
关键词：真菌光滑假丝酵母菌实时荧光定量PCR
资助基金：广东省教育部产学研结合项目(2009B090300281)广东省自然科学基金(9451051501003704)南方医科大学南方医院院长基金(2008B05)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 74-78 )
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