人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞特异性靶向肽的筛选及验证
刘芸
邱妙娟
邱柏钦
李锦梅
1.南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室,教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室,广东广州5105152.南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室,教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室,广东广州5105153.南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室,教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室,广东广州5105154.南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室,教育部重大疾病的转录组和蛋白质组学重点实验室,广东广州510515
摘要：目的:利用噬菌体随机肽库筛选与人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞存在特异性结合的多肽,为实现对肺泡Ⅱ型上皮细胞的靶向干预和开发针对急性肺损伤等呼吸系统疾病治疗的导向药物载体提供实验依据.方法:采用全细胞筛选的方式,通过对人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的4轮筛选和与人前列腺癌上皮PC-3细胞的差减筛选,从噬菌体随机肽库中筛选出与人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞存在特异性结合的多肽,选择丰度较高的一条命名为NTG,用其构建含有增强绿色荧光蛋白(EGFP)的原核表达载体,转化感受态细菌,层析法获得重组蛋白His-NTG-EGFP,测定其分子质量.向A549细胞和PC-3细胞分别加入含有重组蛋白His-NTG-EGFP或His-EGFP的培养基,荧光显微镜下观察.结果:从第1轮至第4轮,淘选所得的噬菌体回收率逐步提高,经过PC-3细胞差减筛选,少量的与A549细胞存在特异性结合的噬菌体得到了回收.重组表达并纯化得到的His-NTG-EGFP,测定其分子质量为33 kD,与预期相符.荧光显微镜下观察发现,经融合蛋白His-NTG-EGFP处理后的A549细胞表面有绿色荧光分布,经融合蛋白His-NTG-EGFP处理后的PC-3细胞以及经对照蛋白处理的A549细胞和PC-3细胞表面均未出现绿色荧光,说明这一融合蛋白可以特异性结合A549细胞.结论:人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞特异性靶向肽被成功获得.
关键词：肺泡Ⅱ型上皮细胞肺损伤急性靶向肽噬菌体展示筛选
资助基金：国家自然科学基金(81100008)南方医科大学科研启动基金(B1012008)广东省医学科学技术研究面上项目(A2013354)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 213-216,封3 )
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