阿帕替尼联合γ-干扰素介导胃癌细胞铁死亡激活cGAS-STING通路促进抗肿瘤免疫反应的作用机制
赵艳争1
郭青1
季艳霞1
苏英2
王琮民3
1.056000 河北邯郸,邯郸市中心医院肿瘤科2.河北工程大学附属医院肿瘤科3.河北工程大学医学院生理教研室
摘要：目的 探索阿帕替尼联合γ-干扰素对胃癌的治疗作用及其可能机制.方法 以人胃癌细胞系MGC803为研究对象,随机分为对照组[仅给予等量1％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理]、阿帕替尼组(给予阿帕替尼8 μmol/L)、γ-干扰素组(给予γ-干扰素100 U/ml)、阿帕替尼+γ-干扰素组(γ-干扰素100 U/ml预处理24 h后,加入阿帕替尼8 μmol/L)和阿帕替尼+γ-干扰素+铁抑素1(ferrostatin-1,Fer-1)组(γ-干扰素100U/ml预处理24 h后,加入阿帕替尼8 μmol/L和Fer-1 1 μmol/L),72 h后进行后续实验.Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)漏出量及丙二醛和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;Ferro Orange探针检测细胞内Fe2+含量;透射电子显微镜检测线粒体结构;JC-1染色检测线粒体膜电位;逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞中线粒体 DNA(mtDNA)和细胞质 dsDNA(cDNA)水平.构建胃癌荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、γ-干扰素组[腹腔注射γ-干扰素1.5 U/(kg·d)]、阿帕替尼组[阿帕替尼200 mg/(kg·d)灌胃]和阿帕替尼+γ-干扰素组[同时腹腔注射γ-干扰素1.5U/(kg·d)和阿帕替尼200mg/(kg·d)灌胃],均干预20 d,每组5只小鼠.免疫荧光染色检测癌细胞MitoSOX-Red表达及癌组织干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)和高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)共定位;Western blot 检测癌细胞人前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、溶质转运蛋白家族7成员11(solute car-rier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase4,GPX4)及癌组织 p-STING、STING、磷酸化-TANK 结合激酶 1(phosphorylated-TANK-binding kinase 1,p-TBK1)和磷酸化-干扰素调节因子 3(phosphorylated-interferon regulatory factor 3,p-IRF3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞中活性氧和脂质活性氧水平及免疫细胞占比.结果 与阿帕替尼组比较,γ-干扰素+阿帕替尼组细胞存活率降低,在阿帕替尼浓度为8 μmol/L时联合γ-干扰素处理达到有效抑制浓度.与对照组MGC803细胞比较,阿帕替尼组LDH漏出量升高,侵袭细胞数和迁移细胞数降低,Fe2+、活性氧、脂质活性氧和丙二醛水平及PTGS2表达升高,GSH含量及SLC7A11和GPX4表达降低,线粒体断裂和嵴缺失,J-aggregate/Monomers荧光强度比值和mtDNA水平降低,MitoSOX-Red相对荧光强度和cDNA水平升高,mtDNA水平降低(P均＜0.05).与阿帕替尼组比较,阿帕替尼+γ-干扰素组MGC803细胞LDH漏出量升高,侵袭细胞数和迁移细胞数降低,Fe2+、活性氧、脂质活性氧和丙二醛水平及PTGS2表达升高,GSH含量及SLC7A11和GPX4表达降低,线粒体断裂和嵴缺失,J-aggregate/Monomers荧光强度比值和mtDNA水平亦降低,Mi-toSOX-Red 相对荧光强度和cDNA水平亦升高(P均＜0.05).构建胃癌荷瘤小鼠模型,与对照组比较,阿帕替尼组小鼠肿瘤体积和质量均降低,肿瘤组织STING和顺式GM130共定位荧光强度及p-STING、p-TBK1和p-IRF3表达升高,DC、CD8+T细胞和中枢记忆T细胞占比增多,耗竭T细胞占比减少(P均＜0.05);与阿帕替尼组比较,阿帕替尼+γ-干扰素组小鼠肿瘤体积和质量均降低,肿瘤组织STING和顺式GM130共定位荧光强度及p-STING、p-TBK1和p-IRF3表达升高,DC、CD8+T细胞和中枢记忆T细胞占比增多,耗竭T细胞占比减少(P均＜0.05).结论 γ-干扰素联合阿帕替尼治疗可能促进由铁死亡相关线粒体应激诱导的mtDNA释放,启动环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate adenylate synthetase,cGAS)-STING通路,改善肿瘤微环境并促进抗肿瘤免疫反应,增强胃癌细胞对阿帕替尼的敏感性.
关键词：阿帕替尼γ-干扰素胃癌肿瘤免疫微环境铁死亡
分类号：R735.2(消化系肿瘤)
资助基金：河北省医学科学研究课题(20220555)
论文发表日期：2025-08-28
在线出版日期：2025-09-18（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：11( 657-667 )
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