人源胆固醇酯转移蛋白的理化性质分析及原核表达
李姝萱1
李静1
冯张羿1
毕延程1
张明1
邱泓铨1
李春燕2
张德福1
1.渤海大学 食品科学与工程学院,辽宁 锦州 1210132.青岛宝迈得生物科技有限公司,山东 青岛 266237
摘要：胆固醇酯转移蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)在高脂血症的发生发展中起着关键调控作用,可通过促进胆固醇酯从高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)向极低密度脂蛋白(very low-density lipoprotein,VLDL)与低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)转移,降低具有心血管保护作用的高密度脂蛋白胆固醇水平、升高致动脉粥样硬化的低密度脂蛋白胆固醇水平,从而导致高脂血症的发生.通过从GenBank数据库获取CETP的编码区(coding sequence,CDS)序列,经生物信息学分析、密码子优化,构建了pCold-CETP原核表达载体,并通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白.生物信息学分析显示,CETP基因CDS区编码493 个氨基酸,预测蛋白分子量约为 54 ku,不稳定系数为32.68,属于稳定亲水性蛋白.密码子优化后,CETP基因的GC(guanine and cytosine)平均含量由 54.7%降至 51.3%,并消除了不利二级结构,显著提高了其在大肠埃希菌中的表达效率.在37℃、10 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)过夜诱导条件下,CETP蛋白主要以包涵体形式存在.经纯化后,SDS-PAGE检测显示清晰的目的蛋白条带,纯化后蛋白质量浓度达13.48 mg/mL.因此,研究成功实现了CETP蛋白在原核系统中的高效表达,并通过密码子优化和诱导条件优化显著提高了蛋白产量,为后续CETP的功能研究及抑制剂开发奠定了基础.
关键词：胆固醇酯转移蛋白生物信息学原核表达重组蛋白蛋白纯化
分类号：Q51(蛋白质)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：辽宁省教育厅高校基本科研项目(LJ212510167019)渤海大学海洋研究院开放基金项目(BDHYYJY2025002)渤海大学海洋研究院开放基金项目(BDHYYJY2024001)国家自然科学基金(32302248)
论文发表日期：2025-12-15
在线出版日期：2026-04-01（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：13( 251-263 )
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