重组抗tau抗体的制备及其在防治阿尔茨海默病中的应用
黄宁
王升平
武彦宏
于清华
郭魏伟
山东立菲生物产业有限公司,山东 青岛 266000
摘要：目的 制备重组抗tau抗体,探讨其在防治阿尔茨海默病(AD)中的应用效果.方法 采用重组人tau441蛋白作为免疫原,获得分泌抗tau抗体的小鼠淋巴细胞.构建鼠源免疫VH-VL基因库,将测序正确的阳性重组质粒转化至PCDNA3.1(+).通过亲和层析纯化获得重组抗tau抗体后,分别采用ELISA法、凝胶电泳法、蛋白印迹法对其效价、纯度、特异性进行鉴定.以小鼠脑神经瘤N2a细胞为研究对象,将N2a细胞分为空白对照组(正常培养)、AD组(通过Aβ25-35诱导建立AD细胞模型)、抗tau抗体组(通过Aβ25-35诱导建立AD细胞模型后采用抗tau抗体处理),采用CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33342染色分析细胞凋亡.结果 成功免疫小鼠并调取抗tau抗体VH、VL基因.通过构建VH-linker-VL载体及亲和层析纯化,获得效价高于1∶256 000、纯度为95.28%的特异性重组抗tau抗体.重组抗tau抗体能够提高Aβ25-35诱导的N2a细胞活力[AD组、抗tau抗体组细胞活力分别为(44.33±2.08)%、(68.00±2.65)%,两组相比P<0.05],并抑制其凋亡.结论 本研究获得抗tau抗体VH、VL序列,制得高效价、高纯度、高特异性重组抗tau抗体,并证实其对Aβ25-35诱导的N2a细胞损伤具有改善作用.
关键词：重组抗体阿尔茨海默病微管相关蛋白tau神经保护
分类号：R742(神经病学与精神病学)
资助基金：产业化示范类项目(23-1-6-ghgg-3-hz)
论文发表日期：2025-08-25
在线出版日期：2025-09-17（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 28-32,40 )
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