pcDNA3/NT-3真核表达载体的构建及其表达
邓兴力1
杨智勇1
王廷华2
徐丹2
黄桂琴2
冯忠堂2
1.昆明医学院第一附属医院神经外科,6500322.昆明医学院神经科学研究所,650031
摘要：目的 构建大鼠神经营养因子3(NT-3)基因真核表达载体并观察其在真核细胞内的表达情况.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NT-3在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为822bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/NT-3酶切后产生822bp和5.2kb的片段,DNA测序证实822bp片段的碱基序列与大鼠NT-3基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/NT-3重组质粒.将其转染真核细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NT-3能在真核细胞中正确表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒载体pcDNA3/NT-3,为后续的研究奠定基础.
关键词：神经营养因子3真核表达重组质粒转染
分类号：R741(神经病学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 351-354 )
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